研究背景：四次甲基二砜四胺（Tetramethylenedisulphotetramine，TET）俗称毒鼠强，是一类神经毒性剧毒鼠药。中毒死亡率极高，国家已禁止生产和使用，但因非法生产和销售使用，中毒事件仍不断发生，少则数十人，多到数百人，严重威胁着人民的生命财产，造成社会动荡不安。张春颖等已在动物实验证实TET是GABA受体拮抗剂，能直接抑制脑内GABA与其受体结合，使中枢神经呈过度的兴奋而惊厥，可因呼吸衰竭死亡。急性TET中毒主要采用洗胃、血液净化清除毒物，安定、鲁米那、VitB₆、钙剂抗惊厥，二巯基丙磺酸钠解毒，以及保护心、肝、脑等综合治疗方法。现研究证实二巯基丙磺酸钠（Na-DMPS）对急性TET中毒动物具有良好的解毒作用，临床也证实有一定效果，但其作用机制不清，且具有一定的肝损害等毒副作用，应用受限。因此寻找一种新的起效快、疗效好且毒副作用小、具有解毒和脑保护作用的药物是目前临床治疗TET中毒急需解决的难题。急性TET中毒可导致严重的脑损害。而目前临床上主要以临床症状（惊厥）来判断脑损害的严重程度及疗效，缺乏一种客观评估脑损害和预后的方法。因此如何寻找一种新的可迅速反映神经系统损伤程度和范围的特异性血清或脑脊液生化标志物，也是急性TET中毒研究中另一个尚未解决的难点。神经元特异性烯醇化酶（Neuron-specific enolase，NSE）和S100蛋白均特异性存在于神经系统内。它们是脑损害的特异性标志之一，它在脑脊液或血中的浓度水平可反映脑损伤的程度和范围。联合测定NSE和S100对诊断不同部位脑组织损害、评估治疗效果及预后判断等均有重要价值。近年来，越来越多的研究结果表明，在脑血管病、脑外伤、癫痫、颅内感染、肝性脑病、一氧化碳中毒性脑病等，脑脊液或血清NSE、S100浓度均有改变，它们是神经元损伤的量的指标，在脑脊液或血中的浓度水平可反映神经系统损伤的程度和范围。测定NSE、S100对神经系统疾病的诊断、判断疾病严重程度，估计预后和指导治疗等方面有重要意义。清开灵注射液是由安宫牛黄丸方制成的中药复方针剂，具有清热解毒，醒神开窍之功效，广泛应用于小儿高热惊厥、昏迷及成人急性脑血管病、肝昏迷等多种疾病的治疗，并对缺血性、感染性脑损伤有脑保护作用。近年来研究发现具有抗谷氨酸神经毒性作用。目的：目前国内外尚无急性TET中毒时血清NSE、S100浓度及脑组织NSE-mRNA、S100-mRNA表达变化的研究。在本实验研究中，主要研究急性TET中毒时，脑损伤的标志物血清NSE、S100浓度变化及脑组织NSE-mRNA、S100-mRNA表达的变化，研究不同剂量的清开灵干预后止痉效果及上述指标的变化。从分子生物水平探讨清开灵对急性TET中毒大鼠的脑保护作用机制，寻找一种新的起效快、疗效好且毒副作用小、兼有解毒和脑保护作用的新药物。方法：SD大鼠随机分成5组，按照公认的方法复制急性TET中毒模型，TET灌胃前30分钟分别腹腔注射生理盐水作为急性TET中毒模型组，腹腔注射Na-DMPS作为Na-DMPS治疗对照组，腹腔注射不同剂量（1ml／100g，2ml／100g，4ml／100g）作为清开灵不同剂量治疗组。观察各组大鼠急性TET中毒后的行为变化，采用ELISA法测定血清NSE、S100浓度变化，应用RT-PCR法检测脑组织NSE-mRNA、S100-mRNA表达的改变。用t检验、SKN-q、四格表Fisher确切法检验进行统计分析，取检验水准α=0.05。结果：1．5组大鼠惊厥潜伏期和发作程度改变：与急性TET中毒组比较，Na-DMPS治疗对照组明显延长惊厥潜伏期和减轻惊厥发作程度（P＜0.01）；清开灵也明显延长惊厥潜伏期和减轻惊厥发作程度，且呈剂量依赖性。中、大剂量（2ml／100g，4ml／100g）清开灵组与急性TET中毒组比较，均有显著性差异（P＜0.01）。与Na-DMPS治疗对照组比较，无显著性差异（P＞0.05）。2．5组大鼠血清NSE、S100浓度改变：与急性TET中毒组比较，Na-DMPS治疗对照组明显降低血清NSE、S100浓度（P＜0.01）；清开灵也能明显降低血清NSE、S100浓度，且呈剂量依赖性。中、大剂量（2ml／100g，4ml／100g）清开灵组与急性TET中毒组比较，均有显著性差异（P＜0.01）。与Na-DMPS治疗对照组比较，无显著性差异（P＞0.05）。3．5组大鼠脑组织NSE-mRNA表达改变：在大鼠大脑皮质中，各治疗组与急性TET中毒组比较，Na-DMPS治疗对照组显著增加脑组织NSE-mRNA表达（P＜0.01），小剂量（1ml／100g）清开灵组无显著性差异（P＞0.05），中、大剂量（2ml／100g，4ml／100g）清开灵组显著增加NSE-mRNA表达（P＜0.01）。不同剂量清开灵组与Na-DMPS治疗对照组比较，小、中剂量清开灵组NSE-mRNA表达低于Na-DMPS治疗对照组（P＜0.01），而大剂量清开灵组NSE-mRNA表达与Na-DMPS治疗对照组无显著性差异（P＞0.05）。在大鼠海马中，各治疗组与急性TET中毒组比较，Na-DMPS治疗对照组表达虽有增加，但无统计学意义（P＞0.05）。不同剂量清开灵组均能显著增加NSE-mRNA表达（P＜0.01），且呈剂量依赖性。4．5组大鼠脑组织S100-mRNA表达改变：在大鼠大脑皮质中，各治疗组与急性TET中毒组比较，Na-DMPS治疗对照组显著增加脑组织S100-mRNA表达（P＜0.01），小剂量（1ml／100g）清开灵组无显著性差异（P＞0.05），中、大剂量（2ml／100g，4ml／100g）清开灵组显著增加了S100-mRNA表达（P＜0.01）。不同剂量清开灵组与Na-DMPS治疗对照组比较，小剂量清开灵组表达低于Na-DMPS治疗对照组（P＜0.01），中、大剂量清开灵组与Na-DMPS治疗对照组无显著性差异（P＞0.05）。在大鼠海马中，各治疗组与急性TET中毒组比较，Na-DMPS治疗对照组显著增加脑组织S100-mRNA表达（P＜0.01），而不同剂量清开灵组表达虽有增加，但无统计学意义（P＞0.05）。结论：1．中、大剂量清开灵能明显延长急性TET中毒大鼠惊厥潜伏期和减轻惊厥发作程度，在合适剂量下，其抗惊厥作用呈剂量依赖性。清开灵能达到与Na-DMPS相同的抗惊厥作用。2．中、大剂量清开灵能明显降低急性TET中毒大鼠血清NSE、S100浓度，提示在合适剂量下，清开灵能达到与Na-DMPS相同的减轻急性TET中毒大鼠脑损害的保护作用，可作为治疗急性TET中毒的新药。3．对急性TET中毒大鼠，中、大剂量清开灵能增加大鼠皮质、海马脑组织NSE-mRNA表达，在一定的剂量范围内，呈剂量依赖性。4．对急性TET中毒大鼠，中、大剂量清开灵能增加皮质脑组织S100-mRNA表达，在一定的剂量范围内，呈剂量依赖性。5．清开灵能增加急性TET中毒大鼠皮质脑组织NSE、S100mRNA表达。清开灵明显增加中毒大鼠海马中NSE-mRNA的表达，不增加S100-mRNA表达。表明清开灵对急性TET中毒大鼠脑S100-mRNA表达在海马和皮质中有差异。