四种检疫性植物病毒的胶体金免疫层析试纸条的研究

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胶体金免疫层析技术目前技术比较的成熟,也有许多关于胶体金灵敏度的报道。将它与ELISA方法的灵敏度进行比对后的得出结论,胶体金免疫层析试纸条的灵敏度与ELISA基本相近,许多实验的灵敏度都可达到1ng/ml或更低水平。胶体金免疫层析试纸条最大的优点在于无需借助实验室的设备和专业技术人员,只需要取少量的植物汁液滴在试纸条上的样品垫上,便可以在十五分钟内得到检测结果,它适合对一些检疫性植物病毒当场、即时地进行检测。菜豆荚斑驳病毒、南方菜豆花叶病毒、烟草环斑病毒和番茄环斑病毒是我国重要的进境检疫性有害生物。就检疫的南方菜豆花叶病毒和菜豆荚斑驳病毒而言,运用ELISA或者是RT-PCR检测这两种病毒时,由于种皮,胚,或胚乳中病毒的含量较低或者含有某些ELISA,RT-PCR反应抑制物,因而检测的难度较大运用,而运用胶体金免疫层析技术在一定程度上可以弥补上两种方法的不足。为解决RT-PCR方法很难直接检测大豆病种子中含有病毒的问题,将简便快捷的胶体金免疫层析技术(GICA)和高灵敏度的普通RT-PCR方法相结合,建立了胶体金免疫层析试纸条和反转录聚合酶链式反应(GICA-RT-PCR)检测方法,即先用GICA捕获病毒,将捕获的病毒直接进行RT-PCR扩增,简化了检测的步骤,提高了检测的灵敏度。本实验将所研究的四种植物病毒制备了胶体金免疫层析试纸条,并用试纸条分别对病叶,感病的种皮一一经行了检测。结果表明:用该方法比单用GICA检测大豆种皮中的TRSV和SBMV灵敏度至少提高了10000倍,BPMV至少提高了100倍。用该方法检测四种植物病毒的病叶灵敏度均比单用GICA方法也有所提高。同时该方法也可以拓展到其他的应用领域,如人体,动物携带病毒的检测等。该方法的一个突出之处就是应用性能比较好,因此可以进行技术推广。
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