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目的:研究miR-144-3p在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化过程中的作用及GATA4对miR-144-3p的调控机制。方法:1、诱导大鼠间充质干细胞成骨分化,诱导后的第0、7、14、21天的分别进行ALP(碱性磷酸酶染色)和ARS(茜素红染色),同时利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time PCR,以下简称q RT-PCR)测定miR-144-3p、及成骨标志基因ALP、Runx2(Runt相关转录因子2)的m RNA的表达量;2、BMSCs细胞转染miR-144-3p mimic、inhibitor及其阴性对照,转染后48h利用q RT-PCR测定miR-144-3p m RNA的表达量,转染后细胞继续成骨诱导48-72h,通过q RT-PCR及蛋白免疫印迹试验(Western blotting)分别测定ALP、Runx2的m RNA及蛋白表达量。3、利用携带Ad GATA-4的腺病毒侵染BMSCs,侵染48h后通过q RT-PCR测定GATA-4、miR-144-3p的miRNA含量,分析GATA-4表达与miR-144-3p的m RNA表达量之间的关系。通过生物信息分析,认为GATA-4可能靶向作用于miR-144-3p启动子的-568和-969区域,构建含一个作用位点-568的质粒P1,含两个作用位点-568和-969的质粒P2,p GL3基本质粒作为对照组,分别转染293T工具细胞,转染48h小时以后,利用双荧光素酶活性试验来验证GATA-4对miR-144-3p的作用位点。结果:1、骨髓间充质干细胞在成骨诱导分化过程中,碱性磷酸酶染色及茜素红染色随着诱导时间的延长其染色越深,且成骨标志基因ALP、Runx2的m RNA表达也随之而增加,而miR-144-3p m RNA的表达是下降的。2、转染后过表达miR-144-3p组较抑制组其成骨标志基因ALP、Runx2 m RNA和蛋白的表达是显著下降的。3、侵染Ad GATA-4组其GATA-4及miR-144-3p m RNA水平的表达,较其阴性对照组及空白对照组显著增加;质粒P1及P2组其免疫荧光活性较转染基本质粒组显著增加。结论:1、miR-144-3p在BMSCs成骨分化过程中起负性调控作用。2、GATA4调控位点在miR-144启动子的568区域和969区域。3、GATA4通过靶向调控miR-144-3p的表达,抑制BMSCs成骨分化。