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腐霉是一类世界性分布的重要菌物,可腐生、寄生或兼性寄生。全世界已报道的腐霉菌达200多种,我国已报道腐霉达58种。腐霉寄主范围广,可寄生多种植物,引起植物猝倒、苗腐、根腐和根颈腐等病害和储藏期种子、果蔬等的腐烂,在国内外均造成较大的损失,目前,超过80种腐霉被报道为植物重要的病原菌,然而,有些腐霉种类如寡雄腐霉、棘腐霉等能杀灭或抑制其他植物病原菌,具有生防价值;还有些腐霉种类如终极腐霉、畸雌腐霉等,能分泌有益化合物,在工、农业和医药上具有重要的应用价值。
海南岛是典型的热带海洋气候,雨热充足,动植物、微生物资源十分丰富。然而,除了余永年记载的海南11种腐霉外(余永年,1998),对其种类和分布至今尚未进行过系统调查。因此,为了明确海南岛腐霉的种类及分布情况,丰富海南岛的菌种资源,为植病生防及工业、医药的微生物资源开发提供菌种来源。本研究于2004~2006年间,从海南岛海口、澄迈、文昌等17个县市及4个热带雨林原始林区的不同地点和不同植物根围采集土壤标样350份,在实验室内采用饵钓和选择性培养基分离获得腐霉菌株1341株,根据形态特征和核糖体rDNA ITSl测序分析,对海南岛的腐霉进行种类鉴定及系统的分布调查,主要研究结果有以下:
1.将1301株腐霉菌鉴定为16个腐霉种和3个不确定种,另外113株腐霉菌不产生有性器官被归入Pythium Group F(A、B、D、C、L、G、P、HS、SP)。这16个腐霉种分别是:刺器腐霉Pythium acanthophoron Sideris、卡地腐霉Pythium carolinianum Drechsler、禾生腐霉Pythium graminicola Subramanian、旋柄腐霉 Pythium heliCOides Drechsler、间型腐霉Pythium intermedium de Bary、肿囊腐霉 Pythium inflatum Matthews、奇雄腐霉Pythium middletonii Sparrow、华丽腐霉Pythium splendens Braun、刺腐霉Pythium spinosum Sawada、棘腐霉Pythium acanthicum DrechSler、瓜果腐霉Pythium aphanidermatum(Edson)Fitzpatrick、链状腐霉Pythium catenuZatum Matthews、德里腐霉Pythium deliense Meurs、木蓝腐霉Pythium indigofereae Butler、群结腐霉Pythium myriotylum Drechsler、钟器腐霉Pythium vexans de Bary,其中,前9个为海南腐霉新记录种。还有3个未明确鉴定的腐霉种为齿孢腐霉Pythium hydnosporum(Mont.)Schroter、Pythium oedochilum Drechsler和Pythium sylvaticum Campbell&Hendrix。
2.对350份土样中各腐霉种的的分离步贞率进行统计分析,结果表明,Py.vexans de Bary的分离频率最高、分布最广,为优势种,其次是py.delienseMeurs、Py.aphanidermature(Edson)Fitzpatrick 和 Py.acanthium Drechsler。
3.通过核糖体rDNAITSl测序与BLASTN分析、同源性比较,从分子水平上明确了菌株Py0623H为旋柄腐霉,菌株Py0600a为刺器腐霉,菌株Py0600c2为卡地腐霉以及菌株Py0410s为华丽腐霉,表明这4个菌株的rDNA ITSl测序结果与形态学初鉴定结果一致,验证了这4个腐霉种形态特征分类结果的可靠性,进一步说明了rDNA ITSl测序分析是腐霉分类的重要辅助工具。
4.华丽腐霉是油棕苗疫病的病原菌,油棕苗疫病是我国对外植物检疫对象,国内至今尚没有报道。本研究从海南岛坝王岭自然保护区长臂猿区所采集的土样中分离出一株腐霉菌株Py0410s,经形念学分类及核糖体rDNAITSl序列分析鉴定为华丽腐霉Py.splendens Braun,并进行了该菌株对油棕苗的致病性测定,结果表明:华丽腐霉分离菌株Py0410s能引起明显的油棕苗疫病症状,为油棕苗疫病的病原菌。