据《本草纲目》记载,石榴皮主治泻痢,下血,脱肛,崩中带下。石榴皮能收敛涩肠,水煎剂治疗久泻、久痢滑脱不禁有效,已载入中国药典。前人的动物实验证实,石榴皮提取物对溃疡性结肠炎、胃溃疡的发生都有一定的抑制作用。随着社会竞争、生存压力的增大,因应激导致的胃肠功能紊乱性疾病----肠易激综合征(IBS)的患病率达到8-16%。IBS的共同特征是胃肠运动功能改变和内脏器官的敏感性异常。那么,石榴皮水提物对应激致胃肠运动异常有无影响?这种影响是通过何种途径发挥作用的?这是本文所要研究的问题。大鼠束缚-浸水应激(RWIS),作为一种心理和躯体的复合应激模型,已被广泛应用于研究应激性胃粘膜损伤的发生机制及其临床治疗药物的筛选。本文通过探索石榴皮水提物对正常大鼠胃肠运动有无影响及作用途径、石榴皮水提物对束缚-浸水应激大鼠胃肠壁内肌间神经丛活动影响的初步研究,为石榴皮药用价值的开发和利用提供动物实验依据。本文的实验研究分为以下三个部分:一、石榴皮水提物对正常大鼠离体胃肠平滑肌运动的影响利用张力换能器和BL-420生物机能系统记录胃肠运动曲线,分别用0.1、0.5、1、5mg/ml 4种浓度的石榴皮水提物、不同药物及1mg/ml石榴皮水提物和不同药物混合液作用于离体胃、小肠和结肠段,分析给药前5min,后5、10min离体胃、小肠和结肠段收缩频率和幅度。与给药前比较,1和5mg/ml 2种浓度的石榴皮水提物对十二指肠段的收缩频率均有明显的抑制作用(P<0.05);0.1、0.5 mg/ml虽然也使频率降低,但无统计学意义(P>0.05);除5mg/ml组在给药后第10min的收缩幅度小于给药前(P<0.05)外,其他各组对收缩幅度的影响均不显著(P>0.05)。各种浓度的石榴皮水提物对胃、结肠的作用与十二指肠类似。1mg/ml的鞣酸、没食子酸分别作用于胃、小肠和结肠段,均可引收缩频率和幅度下降(P<0.05)。5μg/ml的组织胺、氯雷他定对离体胃运动曲线的频率、幅度影响,与给药前比较,差异不显著(P>0.05);这两种药物分别与1mg/ml石榴皮水提物混合后,作用于离体胃时,胃的收缩频率、幅度均显著性的下降(P≤0.01);对大小肠也存在类似的作用。结果提示:石榴皮水提物的1、5mg/ml 2种浓度为引起胃肠平滑肌收缩的有效浓度;起效成分可能是石榴皮水提物中的鞣酸和没食子酸;其作用可能通过调节组织胺活动途径实现的。二、石榴皮水提物对大鼠在体胃肠运动功能的影响动物随机分为双蒸水组、石榴皮水提物组、吗丁啉组和阿托品组,每组6只。灌胃给药,每天一次,连续5天。末次灌药1h后,再灌胃2ml营养性半固体糊,40min后颈椎脱臼处死大鼠。以胃内残留率、小肠推进率和排便的粒数为指标,检测不同药物对大鼠胃肠运动功能的影响。结果发现,与蒸馏水组、阿托品组相比,石榴皮组胃内残留率显著性降低(P<0.05);小肠推进率显著性升高(P<0.05);与吗丁啉组相比,胃内残留率无显著性差异(P>0.05);石榴皮组大鼠排便量分别与蒸馏水组、吗丁啉组组比较,差异均显著(P<0.05);石榴皮与阿托品组比较,差异不显著(P>0.05)。本实验结果提示:石榴皮水提物能够促进正常大鼠胃排空和小肠对食糜的推进作用,该作用与吗丁啉类似。但对大鼠排便量有抑制作用,且该抑制作用与阿托品的类似。三、石榴皮对束缚-浸水应激大鼠胃肠壁肌间神经丛内神经元活动的影响利用Fos蛋白免疫标记法、Fos蛋白与胆碱乙酰化酶免疫双标方法,研究石榴皮水提物对束缚-浸水应激大鼠胃肠壁内肌间神经丛内神经元活动的影响。动物随机分为双蒸水+未应激组、双蒸水+应激组、石榴皮水提物+应激组,每组3只。灌胃给药,每天一次,连续5天。末次灌药1h后,行束缚-浸水应激1h,乌拉坦注射过量处死大鼠,取胃肠,进行免疫组化处理。末次灌药1h后,行束缚-浸水应激3h,同上法处死大鼠,取胃测定胃黏膜损伤指数。结果发现:与对照组相比,石榴皮水提物应激组肌间神经丛的Fos蛋白表达在胃、小肠和结肠中均降低,但胃壁中不显著(P>0.05),小肠和结肠中降低明显(P<0.05)。束缚-浸水应激中这些Fos蛋白表达阳性的神经元大部分为乙酰胆碱能神经元(P<0.05)。胃黏膜损伤指数石榴皮组(n=3)明显高于蒸馏水组(n=3)。结果提示:束缚-浸水应激导致胃黏膜损伤、胃肠壁中肌间神经丛的神经元活动加强,这些被应激激活的神经元大部分为乙酰胆碱能神经元,石榴皮水提物可部分抑制小肠肌间神经丛内胆碱能神经元活动,但是对胃壁肌间神经丛的活动抑制作用则较弱。