水曲柳Fraxinus mandshurica)是我国东北地区珍贵的三大硬阔树种之一,是重要的用材树种。本研究通过对不同取材时期的水曲柳合子胚子叶进行诱导体胚；并通过在培养基中添加5-氮胞苷诱导水曲柳体胚发生；同时使用MSAP技术测定不同取材时期的水曲柳合子胚子叶以及外植体的基因组DNA甲基化状态来研究其与水曲柳体胚发生的关系。为深入解析水曲柳体细胞胚胎发生与外植体基因组DNA甲基化状态的关系奠定基础,为水曲柳体细胞胚胎发生发育的精细调控提供科学依据。研究结果如下：(1)以不同取材时期水曲柳合子胚子叶为外植体诱导体胚发生,在7月下旬的体胚诱导率最高；而愈伤组织诱导率的最高值出现在7月中、下旬,并与其他时期相比差异显著(p<0.05)。因此,确定7月下旬为水曲柳体胚发生的最佳时期。(2)通过MSAP技术,建立了水曲柳合子胚子叶基因组DNA甲基化的检测体系。通过检测不同取材时期水曲柳合子胚基因组在CCGG位点的胞嘧啶甲基化水平,每个时期基因组DNA分别获得933～939条清晰可辨的PAGE谱带。在7月下旬甲基化条带最少,各个时期的甲基化差异不显著。在7月下旬,DNA甲基化水平最低,而其体胚诱导率确实最高。(3)培养基中添加5-氮胞苷对水曲柳体胚发生的外植体状态的比率有影响,但不影响外植体状态的种类。不同浓度的5-氮胞苷对水曲柳体胚发生数影响差异不显著,对畸形胚发生数影响差异显著。其中,20.0μmol/L的5-氮胞苷明显促进畸形胚发生数的增加。5-氮胞苷会明显抑制水曲柳外植体的褐化、愈伤组织的诱导以及体胚发生,不同浓度的5-氮胞苷的抑制效果不同,但都与对照差异显著(p<0.05)。其中,0.5μmol/L的5-氮胞苷的抑制强度最大。(4)不同培养时间添加20.0μmol/L的5-氮胞苷,在第1 d加入促进水曲柳体胚发生数及畸形胚发生数的增加,且与其他处理差异显著(p<0.05)；且抑制水曲柳外植体褐化；显著提高水曲柳愈伤组织诱导率,在其他培养时间加入20.0μmol/L的5-氮胞苷,对外植体的褐化及愈伤组织诱导率都没有显著影响。在第15-21 d加入20.0μmol/L的5-氮胞苷,显著提高水曲柳体胚发生率(p<0.05)。(5)添加5-氮胞苷对外植体褐化的作用趋势与对体胚发生的影响趋势几乎相同,再-次证明了“水曲柳体胚发生必然伴随着外植体褐化”的发现。但是培养基中添加5-氮胞苷对外植体DNA甲基化水平影响效果不明显。