【摘 要】
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目的1:应用荧光量子点标记嗅鞘细胞;2:探讨嗅鞘细胞治疗脊髓损伤的最佳移植时间窗。方法1.用NASH差速贴壁法分离并提纯SD大鼠乳鼠嗅球来源嗅鞘细胞,提取成功后用免疫荧光法鉴定嗅鞘细胞并测定嗅鞘细胞的纯度,用CCK-8试剂盒检测不同代次的细胞生长并绘制细胞生长曲线;2.用荧光量子点标记嗅鞘细胞,用CCK-8试剂盒检测10nm、20nm、30nm、40nm等浓度量子点标记嗅鞘细胞的毒性并绘制细胞生长
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目的1:应用荧光量子点标记嗅鞘细胞;2:探讨嗅鞘细胞治疗脊髓损伤的最佳移植时间窗。方法1.用NASH差速贴壁法分离并提纯SD大鼠乳鼠嗅球来源嗅鞘细胞,提取成功后用免疫荧光法鉴定嗅鞘细胞并测定嗅鞘细胞的纯度,用CCK-8试剂盒检测不同代次的细胞生长并绘制细胞生长曲线;2.用荧光量子点标记嗅鞘细胞,用CCK-8试剂盒检测10nm、20nm、30nm、40nm等浓度量子点标记嗅鞘细胞的毒性并绘制细胞生长曲线,相同浓度量子点标记不同密度嗅鞘细胞并观察期标记效率;3.建立大鼠脊髓半切损伤模型,选取建模成功的大鼠模型,在脊髓损伤后1D、3D、7D、10D时间点移植用量子点标记的嗅鞘细胞,在细胞移植后1D灌注固定后取出损伤处的脊髓,用小动物呈像仪检测聚集到损伤处荧光量大小,用免疫荧光法,检测转移到损伤处嗅鞘细胞。结果1.用差速贴壁法提取分离的嗅鞘细胞,显微镜观察呈现出典型的双极、三级嗅鞘细胞形态,并且胞质透光性好,免疫荧光法测定的嗅鞘细胞计算后的纯度大于85%;2.CCk-8法检测不同代次细胞生长并绘制生长曲线,P5代细胞生长状态最好;3:不同浓度量子点转染嗅鞘细胞后,对细胞生长均有抑制作用,量子点浓度越大,抑制作用越强;4:用相同浓度量子点转染不同密度嗅鞘细胞,均有很高的标记率,说明标记率的大小与细胞密度无关;5:不同时间点转移嗅鞘细胞,用小动物成像仪均可检测到损伤处有荧光聚集,并且7D时荧光的聚集量最多,与其他时间点组比较P<0.05有统计学差异。6:免疫荧光法测定损伤处嗅鞘细胞的量,7D的细胞量最多。结论1:荧光量子点可以作为示踪剂标记嗅鞘细胞;2:不同时间点移植的嗅鞘细胞皆可以转移到脊髓损伤处;3:脊髓损伤后第七天移植的嗅鞘细胞转移到损伤处的细胞数量最多,可以作为移植嗅鞘细胞的最佳时间窗。
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