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目的:Apelin作为G蛋白偶联受体APJ的内源性配体,具有促进单核细胞向内皮细胞粘附等多种生物学效应。本实验室前期研究发现,apelin-13通过PI3K及NOX4-ROS途径诱导单核细胞-人脐静脉内皮细胞粘附;本课题拟研究apelin-13对人脐静脉内皮细胞PRAS40的表达及对内质网应激的影响,并在前期研究的基础上进一步探讨PRAS40-内质网应激途径介导apelin-13促单核细胞-人脐静脉内皮细胞的粘附作用,揭示apelin-13促单核细胞向内皮细胞粘附新的机理,进一步阐明apelin/APJ参与动脉粥样硬化发生发展的机制。方法:1、Western Blot检测人脐静脉内皮细胞PRAS40、P-PRAS40、Bip、CHOP、ICAM-1、VCAM-1的表达;2、生物信息学蛋白相互作用STRING分析软件预测PRAS40与内质网应激标志蛋白Bip、CHOP之间的相互作用;3、Si RNA沉默人脐静脉内皮细胞PRAS40,观察其对内质网应激及细胞粘附情况的影响;4、用Calcein AM标记单核细胞后,用荧光显微镜检测apelin-13对单核细胞-人脐静脉内皮细胞粘附的影响;5、用Calcein AM标记单核细胞后,多功能酶标仪检测apelin-13对单核细胞-人脐静脉内皮细胞的粘附效率。6、免疫组织化学观察Apo E-/-(HFD)小鼠动脉粥样硬化冠状动脉血管内皮组织p-PRAS40 PRAS40、p-PRAS40、Bip、CHOP的表达情况。结果:1、Apelin-13浓度(0-1.0μM)依赖和时间(0-24h)依赖促人脐静脉内皮细胞PRAS40的表达;2、Apelin-13浓度依赖(0-1.0μM)和时间(0-30min)依赖促人脐静脉内皮细胞p-PRAS40的表达;3、APJ拮抗剂F13A降低Apelin-13促人脐静脉内皮细胞PRAS40、Bip、CHOP的表达;4、PI3K阻断剂LY294002降低apelin-13促人脐静脉内皮细胞PRAS40、p-PRAS40的表达;5、Class III PI3K阻断剂3-MA降低apelin-13促人脐静脉内皮细胞PRAS40、p-PRAS40的表达;6、RNA干扰沉默PRAS40下调apelin-13促人脐静脉内皮细胞PRAS40的表达;7、生物信息学STRING软件分析提示PRAS40与内质网标志蛋白Bip、CHOP之间有相互作用;8、Apelin-13浓度(0-1.0μM)依赖和时间(0-24h)依赖诱导人脐静脉内皮细胞内质网应激标志蛋白Bip和CHOP的表达;9、RNA干扰沉默PRAS40下调apelin-13促人脐静脉内皮细胞内质网网标志蛋白Bip、CHOP的表达;10、Apelin-13浓度(0-1.0μM)依赖和时间(0-24h)依赖促人脐静脉内皮细粘附分子ICAM-1表达;11、RNA干扰沉默PRAS40下调apelin-13促人脐静脉内皮细胞粘附分子ICAM-1、VCAM-1的表达;12、内质网应激抑制剂Salubrinal阻断apelin-13诱导人脐静脉内皮细胞粘附分子ICAM-1、VCAM-1的表达;内质网诱导剂Tunicamycin对apelin-13诱导人脐静脉内皮细胞粘附分子ICAM-1、VCAM-1的表达无影响;13、RNA干扰沉默PRAS40下调apelin-13促单核细胞-人脐静脉内皮细胞粘附;14、内质网应激抑制剂Salubrinal抑制apelin-13促单核细胞-人脐静脉内皮细胞粘附;内质网诱导剂Tunicamycin对apelin-13促单核细胞-人脐静脉内皮细胞粘附无影响。15、Apo E-/-(HFD)小鼠动脉粥样硬化模型冠状动脉血管内皮组织p-PRAS40PRAS40、p-PRAS40、Bip、CHOP的表达增加。结论:PRAS40-内质网应激途径介导apelin-13促单核细胞-人脐静脉内皮细胞粘附。