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本文对核桃蛋白肽的功能活性进行了研究,测定了核桃粕发酵产物对细胞增殖的影响、抗肿瘤活性以及体外ACE抑制活性,采用中空纤维膜超滤系统对核桃蛋白肽进行了分离纯化,检测了不同分子片段多肽的功能活性:并运用UPLC-MS/MS的方法鉴定了多肽的氨基酸序列。主要研究内容和结果如下:1、固态发酵制备的核桃蛋白肽用中空纤维膜超滤系统分离后,分子量大于10KDa(F1)肽产量为15.71%,多肽含量为69.21%;5KDa-10KDa(F2)肽产量为22.93%,多肽含量为67.43%;1 KDa-5 KDa(F3)肽产量为29.24%,多肽含量为75.31%;小于1KDa(F4)的肽产量为32.11%,多肽含量为63.18%。进一步表明发酵制备核桃蛋白肽是一种可行、高效的方法。2、核桃蛋白肽体外ACE抑制活性测定结果表明,四个组分对ACE的半抑制浓度分别为:F1 组分 330 μg/mL,F2 组分 263.8 μg/mL,F3 组分 102.1 μg/mL,F4组分39.76 μg/mL;其抑制活性与分子量相关,分子量越小、活性越高,已接近临床用降血压药卡托普利的抑制活性(IC50=20.36 μg/mL)。F4组分IC50的重现性较好;其抑制类型为非竞争性抑制。3、核桃蛋白肽对3T3-L1细胞增殖的影响结果显示,核桃蛋白肽F1、F2和F3组分对3T3-L1细胞没有毒性,且有促进生长的作用,其中F3组分作用直观明显,可以显著增加细胞数量,延长细胞的培养周期,可部分替代血清加入到细胞培养基中,作为营养物质供细胞吸收利用。F4组分对3T3-L1细胞有轻微毒性,主要影响细胞形态,会造成细胞萎缩,并且会抑制细胞的增殖。4、核桃蛋白肽对肿瘤细胞抑制实验结果显示,四个组分以及粗提物对SGC-7901和小鼠S180两种癌细胞的作用效果各不相同。粗提物对两种细胞都是促进生长作用,F2组分对S180细胞也有一定的促进生长效果;F1和F3组分对两种细胞都有一定的抑制作用。F4组分对两种细胞的半抑制浓度分别为:SGC-7901细胞0.648 mg/mL、S180细胞0.932 mg/mL。核桃蛋白肽对肿瘤细胞的形态也有影响,如大小不均,易于裂解死亡等。5、核桃蛋白肽F1组分多肽相对分子量以及氨基酸序列的鉴定。从核桃蛋白肽F4组分中鉴定出了两种多肽,它们的氨基酸序列分别是Val-Gln-Thr-Leu(VQTL,459.351 Da)和 Leu-Gly-Tyr-Glu-Asn(LGYEN,594.276 Da)。