金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是医院感染的重要病原菌之一,也是生物膜感染常见的病原菌,在ICU导管相关感染败血症的致病原中,金黄色葡萄球菌占15.4%,居第二位。形成生物膜的金黄色葡萄球菌具有高度的耐药性并能逃避免疫系统的攻击,其感染易慢性化并难于控制,因此对金黄色葡萄球菌等临床重要病原菌的生物膜形成机制的研究已成为抗感染研究领域的热点。目前对金黄色葡萄球菌生物膜的形成机制仍不清楚。初步研究显示生物膜的形成首先是由细胞壁相关因子调节的细胞表面的附着,随后细菌主要通过ica操纵子表达产物共同催化合成的多糖胞间粘附素(polysaccharide intercellular adhesin, PIA)介导,细胞增殖并相互聚集成细胞团块,继而形成生物膜。该过程中有多个基因参与调控生物膜的形成。其中革兰氏阳性菌中σ因子编码基因sigB的表达可能是生物膜形成的关键调控因素之一。它除可通过直接调节控制生物膜形成的ica操纵子的表达外,尚可影响ica的调控基因sarA和/或agr的表达。但新近采用对特定的金黄色葡萄球菌实验室菌株敲除sigB基因的研究发现,sigB缺失的菌株在某些条件下仍能形成生物膜。鉴于这些研究多局限于几株特定的实验室菌株,为明确sigB基因在金黄色葡萄球菌形成生物膜中的意义,本研究以第三军医大学第一临床医学院2004年7月-2004年12月分离的野生菌株为研究对象,在明确其耐药及生物膜形成情况的基础上,PCR扩增分析金黄色葡萄球菌中生物膜形成相关调节基因的存在情况;筛选可形成生物膜的菌株,采用融合PCR的方法构建金黄色葡萄球菌sigB同源重组质粒,为建立sigB缺失的野生金黄色葡萄球菌模型奠定基础。研究分三部分进行:1.临床分离金黄色葡萄球药物菌敏感性和形成生物膜的检测2.金黄色葡萄球菌生物膜形成相关基因的PCR分析3.金黄色葡萄球菌sigB同源重组质粒的构建1.方法1.1金黄色葡萄球菌敏感性(最小抑菌浓度)用琼脂稀释法测定;生物膜形成的检测用96孔板番红染色法。1.2 icaAD、icaBC、sar、agr和sigB基因采用PCR法扩增,并对产物进行测序和