论文部分内容阅读
SNX-2112是近年来开发的一种新型Hsp90抑制剂,课题组前期进行了临床前的药理学及毒理学研究,以及对K562、A375细胞的作用及机制研究,结果表明SNX-2112具有良好的抗肿瘤作用。本论文主要进行了如下几个方面的研究,包括：1、SNX-2112敏感肿瘤细胞株的筛选：通过MTT法检测了SNX-2112对正常细胞株、肿瘤细胞株和肿瘤多药耐药细胞株的生长抑制作用,选定MCF-7乳腺癌细胞为论文的主要研究对象。2、SNX-2112抑制MCF-7细胞生长的作用及机制：采用共聚焦、流式细胞术及免疫印迹等方法,从形态学、细胞周期、凋亡以及Hsp90客户蛋白等方面进行机制研究。3、SNX-2112激活MCF-7细胞的非折叠蛋白反应(UPR)：采用免疫染色-共聚焦分析及免疫印迹等方法,从内质网UPR相关蛋白的细胞定位及表达等方面进行机制研究。4、SNX-2112诱导胞内靶点蛋白Hsp90发生断裂：采用免疫印迹、共沉淀、质谱以及信号通路抑制剂干预等方法,阐述SNX-2112诱导自身靶点Hsp90发生断裂的前因后果。5、SNX-2112抑制MCF-7/ADR多药耐药细胞生长的作用及机制：采用MTT、共聚焦、原子力显微镜、流式细胞术和免疫印迹等方法,从细胞形态、表面形貌、凋亡、P-gp及联合用药等角度进行研究。结果表明,1、SNX-2112对L-02细胞的毒性较小,对肿瘤敏感细胞和多药耐药细胞都有较好的抑制作用。2、SNX-2112可诱导细胞发生G2期阻滞,激活线粒体途径的细胞凋亡,抑制关键客户蛋白HER2、Raf-1、Akt和Ikka的下调。3、SNX-2112可下调内质网二硫键异构酶体系的表达,下调GRP94的表达,上调GRP78的表达,激活内质网URP。4、SNX-2112可诱导细胞内靶点蛋白Hsp90发生中间结构域的断裂,半胱氨酸蛋白酶抑制剂可阻断Hsp90断裂的产生,并伴随着影响Hsp90客户蛋白的表达。5、SNX-2112虽然不影响MCF-7/ADR多药耐药细胞的P-gp表达,但可诱导细胞凋亡、S期阻滞、改变细胞表面形貌,且可与顺铂、阿霉素协同抑制MCF/ADR细胞的生长。结论：SNX-2112作为一种广谱、高效、低毒、可克服耐药的新型Hsp90抑制剂,具有诱导肿瘤细胞凋亡、周期阻滞、激活内质网UPR、诱导自身靶点断裂等作用机制,这些作用机制将为临床合理应用SNX-2112提供一定依据。