烟草提取物抑菌活性研究

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本研究以NC82、CF87、FC8、V2、B22、净叶黄、革新3号为材料,以正己烷、95%乙醇、无水乙醇、80%乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、石油醚(30-60℃)、二氯甲烷为提取溶剂,采用生长速率法测定烟草提取物对真菌的抑制作用,采用杯碟法测定提取物对细菌的抑制作用;运用色谱仪器对烟草提取物中主要次生代谢物质的含量进行测定;采用扫描电镜、透射电镜观察西柏三烯醇类提取物对苹果腐烂病菌(Valsa mali)超微结构的影响;运用DPS v7.05软件及Excel 2010对数据进行处理分析。从而探究烟草提取物的抑菌特点、主要的抑菌活性成分及可能的抑菌机理,为烟草的综合开发利用提供理论依据。具体结果如下:(1)烟草提取物对革兰氏阴性菌—大肠杆菌和铜绿假单胞杆菌无抑制作用;而对革兰氏阳性菌—金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有抑制作用,但抑制作用微弱。(2)烟草提取物对苹果腐烂病菌等11种病原真菌的菌丝生长均有抑制作用,尤其对子囊菌亚门核菌纲—苹果炭疽病菌、苹果腐烂病菌和半知菌亚门丝孢纲—番茄枯萎病菌、棉花枯萎病菌、黄瓜枯萎病菌的抑制效果较好,抑制率均超过50%。以CF87品种鲜烟叶正己烷提取物为例,0.5 g/m L CF87品种鲜烟叶正己烷提取物对苹果腐烂病菌的抑制率为94%,EC50为0.185 g/m L;对苹果炭疽病菌的抑制率为58%,EC50为0.422 g/m L。(3)烟草提取物的抑菌活性与提取溶剂的极性有关,弱极性溶剂(二氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚、正己烷)提取物的抑菌活性优于强极性溶剂提取物。从价格、实验的可操作性及对身体健康的影响三个方面综合考虑,正己烷更适合作为烟草提取物的提取溶剂。(4)通过烟草不同品种提取物的抑菌活性结果,比较得出:烟草CF87品种提取物的抑菌活性显著高于其余烟草品种提取物的抑菌活性,说明烟草提取物抑菌活性与烟草品种的选择有关。(5)烟草不同器官提取物的抑菌活性不同,同浓度烟草花提取物的抑制效果显著优于烟叶提取物。烟草不同器官提取物对苹果腐烂病菌的抑制作用最强,其中0.5 g/m L花提取物对苹果腐烂病菌的抑制率为95%。(6)调制前后烟叶提取物的抑菌活性不同,调制前烟叶提取物对三种供试真菌的抑制效果显著优于调制后烟叶提取物。烟叶调制是对鲜烟叶进行诸如烘烤、晾晒等的加工处理,经过这一系列处理后,烟叶中很多活性成分会受到损伤,进而影响烟叶的抑菌活性。(7)通过对绿原酸、茄尼醇、芸香苷、烟碱的纯物质溶液与其混合溶液的抑菌活性测定,以及烟草提取物中具有抑菌活性的主要次生代谢物质含量与提取物抑菌活性的相关关系分析,结果表明:西柏三烯醇类物质可能是烟草提取物中对真菌产生抑制作用的主要活性物质,而烟草提取物中多酚类、黄酮类、甾醇类、部分萜烯类物质与提取物的抑菌活性之间没有明显的相关关系。通过西柏三烯醇类提取物的抑菌活性试验及抑菌机理探究,进一步验证了西柏三烯醇类物质的抑菌活性,并且发现它可能通过破坏膜结构来抑制菌丝生长。
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