目的： 1、探讨建立一种特异性和敏感性较高的免疫磁珠分选检测前列腺癌循环肿瘤细胞的方法，以利于发现早期前列腺癌隐匿性微转移，评估前列腺癌的预后，监测术后前列腺癌复发与转移。 2、联用免疫磁珠和实时荧光定量RT-PCR检测前列腺癌患者外周血微转移，评价其在判断前列腺癌外周血微转移发生中的临床应用价值。 方法： 1、体外培养前列腺癌LNCaP细胞，将其制成细胞悬液，细胞悬液和事先已与单克隆抗体(鼠抗人PSMA单抗)预孵育的包被人抗鼠IgG抗体的磁珠作用，显微镜观察其与免疫磁珠结合的情况，计算玫瑰花环形成率，并观察其与不同浓度的单抗作用时的玫瑰花环形成率，摸索最佳反应条件。台盼蓝染色检测分选前后癌细胞存活率。将LNCaP细胞分别与外周血单个核细胞(PBMC)及全血细胞混合，与预孵育的免疫磁珠作用，磁架分离，显微镜观察，进行灵敏度的检测。 2、本研究的临床病例包括前列腺癌(PCa)组53例，年龄57～85岁，平均73岁，经Jewett临床分期：B期7例，C期19例，D期27例：经Gleason病理分级：高分化癌12例，中分化癌18例，低分化癌23例；良性前列腺增生(BPH)组30例，年龄35～88岁，平均68岁；正常对照组5例。 3、采集前列腺癌和BPH患者及正常对照组外周血5ml于EDTA-K2抗凝的真空管中，分离单个核细胞，应用已经建立的免疫磁珠检测外周血微转移前列腺癌细胞的方法学进行分选，分选后的细胞提取RNA，应用实时荧光定量RT-PCR方法检测PSAmRNA来鉴定分选结果，从而判断患者外周血微转移的存在与否。PSAmRNA的实时荧光定量RT-PCR检测方法是本实验室已经建立的。本研究对联用免疫磁珠和实时荧光定量RT-PCR判断前列腺癌外周血微转移发生的临床应用价值进行了分析评价。 结果： 1、成功建立免疫磁珠法检测外周血微转移前列腺癌细胞的方法学。随着PSMA单克隆抗体浓度的增高，LNCaP细胞与免疫磁珠的结合率也增高。当单抗浓度为5μg/ml时，结合率最高，玫瑰花环形成率可达到90％，单抗浓度继续增加，二者结合率不再升高并略有下降。且分选后癌细胞存活率较之分选前未明显改变。该方法敏感性高，当PBMC与LNCaP细胞比例为106:1时可以检测到癌细胞，检测灵敏度可达20个肿瘤细胞/ml外周血。 2、临床病例检测结果：5例正常对照者中未检测到阳性结果；30例BPH患者中检测到1例阳性；53例前列腺癌患者中有23例阳性，阳性率43.4％，其中ECT证实的27例骨转移癌患者中，有17例阳性，阳性率达到63％。 结论： 免疫磁珠法是一种高效、快捷、灵敏、特异并且临床实用价值高的检测技术，可为临床早期发现前列腺癌微小残留提供新的思路，其联合实时荧光定量RT-PCR方法判断前列腺癌患者外周血微转移的发生有助于转移前列腺癌的早期诊断及其治疗和预后判断。