1研究背景与目的食管癌是世界六大致死性肿瘤之一,高居中国恶性肿瘤死亡率第4位,是一种高度致死性的肿瘤。年龄因素与肿瘤发病和预后明显相关,仅约10%食管癌患者在50岁以下发病,而其预后与老年食管癌差异尚不清楚。在相同的生长环境下为什么这少部分人会较早发病,这些人与老年食管癌患者有什么差异,两者的生存期有无差别,若有差别又是哪些因素导致了这种差异的产生呢?食管癌的发生是一个多因素参与多阶段演化的复杂过程,环境因素和遗传因素共同影像其发生、发展。食管癌是一个地域性分布很强的疾病,使我们想到环境因素的影响；它又有明显家族聚集的特征,多归因于遗传因素的影响。性别也是一个重要的影响因素,男性食管癌发病率明显高于女性,有研究表明雌性激素是食管癌的保护因素。本研究旨在通过分析食管癌高、低发区青老年食管癌患者生存随访及其与性别、家族史、肿瘤临床病理等的关系,探讨青老年食管癌患者生存期的差异,加深对青老年食管癌预后影响因素的了解。2材料与方法2.1研究对象本研究所用的的11829例患者地域上主要分布在河北、河南、山西三省交界的太行山食管癌高发区,确诊时间在1973-2012年间,平均年龄60.4±8.9岁,男性7395例,平均诊断年龄60.1±8.809岁,中位诊断年龄60(26-88)岁,女性4434例,中位诊断年龄61(26-95)岁,男女比例为1.67：1；11,829例有生存期患者中2051例通过GWAS平台分析测得3个重要SNPs位点(rs1, rs2和rs3)。2.2患者资料收集和随访通过大规模现场入户流调和问卷调查和(或)电话随访及住院病理结果核查等方法收集患者信息。血样采集与问卷调查同步进行,均取得患者本人和(或)家属知情同意。每例样品抽取空腹静脉血5ml,核对血样和调查表对应无遗漏后集中运回实验室。分存为2-3份后于-40℃冰箱中冷冻保存,以备DNA提取或其它方式使用。31,354例患者全部经组织病理诊断为食管癌,每次胃镜检查及活检均由2名或以上专科医师执行。2.3基因分析实验室提取DNA、测定浓度并标化,GWAS平台分析测得3个重要SNPs位点(rs1, rs2和rs3),并通过tagman法检测其基因型分布。2.4统计方法采用采用SPSS17.0统计软件,卡方检验分析各组间的差异、3个SNPs位点的Hardy-Weinberg平衡检测,Bonferroni法进行组间的两两比较；Kaplan-Meier法进行生存期比较、绘制生存曲线,Log-rank检验验证生存曲线；Cox比例风险回归模型对A、B两组生存风险进行评估,并均衡其它因素的影响。检验水准α=0.05,双侧。3结果3.1青老年食管癌的差异分析3.1.1青老年食管癌分布与性别、高低发区、家族史、肿瘤浸润程度、淋巴结转移、肿瘤分化程度、早中晚分期及大体类型分布的关系：青老年食管癌分布与性别、高低发区、肿瘤浸润程度、远处转移、肿瘤分化程度、早中晚分期分布差异有统计学意义(P值依次为0.001、0.000、0.017、0.000、0.000、0.000),与家族史、淋巴结转移、大体类型(早期分型、中晚期分型)分布无统计学差异(P值依次为0.135、0.229、0.275、0.301)。3.1.2青老年食管癌的五年生存率依次为67%、52%,中位生存时间依次为16.92年和5.59年。两者的生存曲线差异有统计学意义(χ2=91.344,P<0.001),青年食管癌患者生存期明显优于老年食管癌。3.1.3女性食管癌患者预后明显优于男性(χ2=35.348,P<0.001),男性和女性均为青年食管癌患者生存期优于老年患者。3.1.4高发区食管癌患者预后明显优于低发区(χ2=9.182,P=0.002),但两条生存曲线有交叉。高发区和低发区均为青年患者生存期优于老年患者。3.1.5家族史阳性食管癌患者预后明显优于家族史阴性(χ2=9.985,P=0.002)。家族史阳性和阴性均为青年食管癌患者生存期优于老年患者。3.1.6原位癌、肿瘤侵及粘膜、肌层、外膜和外膜外的生存曲线差异有统计学意义(χ2=392.806,P<0.001),肿瘤浸润程度越深生存期越短。其中肿瘤侵及外膜和外膜外的生存期分布无统计学差异(P=0.137)。除原位癌和外膜外肿瘤外,各层均为青年食管癌患者生存期优于老年患者。3.1.7淋巴结转移阳性食管癌患者较阴性者生存期短(χ2=521.593,P<0.001),两者均为青年食管癌患者生存期优于老年患者。3.1.8高、中、低分化食管癌患者生存曲线差异有统计学意义(x2=81.019,P<0.001),三者进行两两比较发现高中低分化患者之间生存曲线差异皆有统计学意义,分化程度越高预后越好。三者均为青年食管癌患者生存期优于老年患者。3.1.9早、中、晚期食管癌患者生存曲线差异有统计学意义(x2=503.120,P<0.001),即早期食管癌患者预后明显优于中晚期食管癌。三者均为青年食管癌患者生存期优于老年患者。3.1.10Cox比例风险回归模型校正年龄、性别、家族史、T分期、N分期、分化程度、早中晚分期后发现：年龄、性别、T分期、N分期、分化程度、早中晚分期与生存期有关,女性、青年(<50岁)、较早的T分期、N分期、分化程度、早中晚分期的死亡风险较低(均为P值均<0.001,HR值分别为1.471、0.895、1.081、1.307、1.606、1.196和1.158),肿瘤家族史、远处转移与生存期无统计学差异(P值分别为0.071和0.354,HR值分别为1.081和1.196)。3.23个SNPs与A、B两组食管癌分布及生存期分析3.2.13个SNPs的Hardy-Weinberg遗传平衡检验哈迪-温伯格遗传平衡检验结果提示除rs3(x2=4.215, P<0.05)在本次2051例研究对象中不符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律外,其余2个SNPsrsl和rs2均符合(依次为x2=0.003,P=0.954和x2=0.485, P=0.486)。3.2.22个SNPs的分布情况rsl和rs2在A、B两组分布无差异(P值分别为0.912和0.071),rs1在远处转移阳性与阴性患者的分布有差异(x2=6.526,P=0.038)。说明两基因分布在食管癌两组发病年龄患者间无差异,但rs1等位基因分布在有无发生远处转移的患者间不同。3.2.32个SNPs的生存期情况rsl和rs2与食管癌生存期的Kaplan-Meier分析显示：rsl和rs2位点遗传多态与食管癌的生存期(预后)无统计学意义(经Log-rank检验P值分别为0.315和0.421)。在Cox分析调整性别、年龄、T分期、N分期、分化程度和早中晚分期后,rsl和rs2对生存期的影响均无统计学意义(均为P>0.05),因此,rs1和rs2均不是食管癌生存期的影响因素。4结论4.1青年食管癌患者预后优于老年。考虑到高低发区、性别、家族史、不同TNM分期、淋巴结和远处转移、分化等因素后,青年食管癌患者优于老年的情况依然存在。可能与其青年食管癌患者生物学行为较好,且易早发现、早治疗和获得较好的治疗和康复支持有关,且与雌激素对女性的保护、家族史阳性和高发区对食管癌警惕性高有关。4.2rsl和rs2均不是食管癌生存期的影响因素,在A、B两组间等位基因分布无差异。Rsl等位基因分布不同可能与远处转移的发生与否有关。4.3rsl和rs2均是食管癌生存期的影响因素,但两者均不是影响生存期的独立因素。