【摘 要】
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背景和目的 原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)早期不易被发现，然而从免疫学角度来说肿瘤细胞的改变可以被免疫细胞识别并被免疫系统排斥，从而发现和诊断HCC。用分
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背景和目的 原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)早期不易被发现，然而从免疫学角度来说肿瘤细胞的改变可以被免疫细胞识别并被免疫系统排斥，从而发现和诊断HCC。用分子生物学和免疫学的方法鉴定出这些改变的基因和蛋白，可能会为敏感、特异的诊断及免疫治疗提供潜在的靶位。HCC发生发展的分子基础之一是多基因表达，但目前总体上HCC的抗原及其编码基因还远不清楚，对HCC的抗原研究及以其作为疫苗进行免疫治疗尚处于不成熟阶段，急需寻找新的抗原分子及鉴定其表位。特异性细胞免疫治疗的关键在于寻找合适的肿瘤抗原及其抗原表位，而SEREX(serologicaI analysis of recombinant cDNA expression library)方法是鉴定抗原分子的一种方便且高效的方法，迄今为止，用该方法筛选出的HCC相关抗原已有三十多种。因此，我们采用SEREX方法，以HCC患者的血清筛选其cDNA文库，鉴定出HCC表达的肿瘤抗原，期望为HCC的诊断和预后提供新的标记物，为HCC疫苗的研制及免疫效果监测打下基础，并且为探讨HCC发生、发展的分子机理提供依据。 方法 1．将HCC表达文库铺板，转膜，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白质表达，封闭，同预吸收血清反应后，与二抗反应，在二氨联苯胺(DAB)的作用下显色，抗原抗体复合物处呈现紫蓝色。重复铺板和筛选3次，直到获得单克隆免疫阳性重组噬菌体。2．挑取阳性噬菌斑，噬菌斑块于SM缓冲液中4℃保
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