【摘 要】
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本研究以新疆伊吾县野山杏为试验材料,通过优选最佳树脂类型,优化野山杏果肉总黄酮[TotalFlavonoids from Wild Armeniaca sibirica(L.)Lam,TFWA]的纯化工艺条件;建立同时测定
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本研究以新疆伊吾县野山杏为试验材料,通过优选最佳树脂类型,优化野山杏果肉总黄酮[TotalFlavonoids from Wild Armeniaca sibirica(L.)Lam,TFWA]的纯化工艺条件;建立同时测定野山杏果肉中4种黄酮类化合物(原花青素、芦丁、柚皮苷二氢查尔酮、槲皮素)含量的反相高效液相色谱分析方法,对野山杏果肉中总黄酮进行分离纯化及含量测定。通过建立动物模型初步探究野山杏果肉中总黄酮纯化物对镇痛及抗炎作用的影响,为进一步开发利用新疆特色药食同源植物提供理论依据。主要研究结果如下:(1)通过筛选4种大孔吸附树脂,确定最优纯化野山杏果肉总黄酮的树脂类型,采用单因素实验确定野山杏果肉总黄酮粗提物纯化工艺。四种大孔树脂中,D-101对野山杏总黄酮解吸率达到14.44%,纯化效果最佳。通过单因素实验筛选大孔吸附树脂纯化野山杏果肉总黄酮的最佳工艺,采用标准曲线法测得野山杏果肉纯化物中总黄酮含量为52.37%。(2)通过RP-HPLC法同时测定野山杏果肉中4种黄酮类化合物的含量,并通过方法学考察对该分离方法进行验证。在优化的液相色谱条件下,芦丁、槲皮素、原花青素、柚皮苷二氢查尔酮4种黄酮成分色谱峰在20 min内能完全分离,线性范围为0.52~56μg/m L(r=0.9998~1),加样回收率为92.13%~96.70%,RSD为0.89%~1.96%。(3)采用三种经典镇痛模型,以阿司匹林作为阳性对照组,测定一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)含量变化,研究野山杏果肉总黄酮不同剂量组的镇痛效果。野山杏果肉总黄酮高、中剂量组对小鼠扭体反应次数的降低,舔足反应和甩尾反应潜伏期的延长都有极显著作用(P<0.01),同时,血清和脑组织中NO含量显著升高(P<0.01),PGE2含量显著降低(P<0.01);建立小鼠急性炎症模型,采用地塞米松作为阳性对照组,考察野山杏总黄酮的抗炎作用。各剂量组的野山杏果肉总黄酮对微血管通透性增高、蛋清和二甲苯诱导的足趾和耳肿胀反应有显著抑制作用(P<0.01)。综上所述,可以得出以下结论:D-101大孔吸附树脂对野山杏果肉总黄酮的分离纯化效果最好;采用RP-HPLC法同时测定野山杏果肉中4种黄酮类化合物的含量,方法快速、准确且稳定性好、可重复性强;野山杏总黄酮具有镇痛及抗急性炎症作用,并与剂量呈正相关性。
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