基于DNA探针的传感器用于p53 DNA及甲氧檗因检测的研究

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随着现代生物技术的进步、固相化学的发展和DNA自动合成仪的诞生,DNA探针得到了飞速的发展。DNA探针能够与多种目标物特异性结合,形成多种灵活的分子识别和信号转换机制,因此基于各种设计巧妙、性能优良的新型DNA探针构建的生物传感器被开发研制,并在基因分析、疾病诊断、卫生防疫、药物机理分析、生物工程等领域得到了广泛的应用。本论文利用DNA探针的特点构建了生物传感器用于p53 DNA和小分子药物简便、廉价、灵敏的检测。  1.利用微孔式DNA传感器和便携式血糖仪检测p53 DNA。  便携式血糖仪由于成本低、操作简单、定量结果可靠,因此被作为是一种常规的家用血糖检测的商品化小型仪器。利用便携式血糖仪具有比较常见、成本低、操作简单和定量结果可靠等优点,并与微孔式DNA传感器结合,发展了一种简便、高灵敏,并且可以同时对多浓度进行检测的p53 DNA生物传感器。该方法的最大优点是可以将p53 DNA的检测转换成血糖的检测,从而利用常见的便携式血糖仪即可实现检测,并且检测下限为1pM,具有良好的特异性,甚至可以识别碱基错配的DNA。  2.利用微流通池式DNA传感器和便携式血糖仪检测p53 DNA。  利用玻璃具有透明性、耐腐蚀、润湿能力及毛细作用等优点,设计了易于修饰的玻璃.金膜微流通池式芯片:同时为了进一步简化传感器的制作工艺和降低成本,将昂贵的金膜替换成玻璃,因此设计了玻璃.玻璃微流通池式芯片。结合便携式血糖仪,采用和第一部分工作类似的原理,将检测p53 DNA转换为检测血糖,实现了对p53 DNA的高灵敏检测。该传感器制作工艺简单,大大地降低了检测成本,操作简便,有望进行大规模生产并用于实际生产生活应用中。  3.纳米金颗粒增强信号的表面等离子体共振传感器高灵敏检测甲氧檗因。  建立一种基于纳米金颗粒增强信号的SPR生物传感器用于高灵敏检测抗癌药物甲氧檗因。一个甲氧檗因小分子可与四个腺嘌呤(A)相结合,从而使得修饰在纳米金颗粒和金膜表面的富含A碱基的DNA形成稳定的双链结构,进而将功能化纳米金颗粒捕获在金膜表面。由于纳米金颗粒与金膜之间的电场耦合效应可增强表面等离子体共振信号,从而可实现对甲氧檗因的高灵敏检测。该传感器的检测下限低至0.07pmol/L,相对比色法和荧光法而言,降低了约5-6个数量级。
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