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摘要人用狂犬病疫苗的生产采用了不同毒株,如PM、FLURY、AG、AV、CTN-1等[1],在疫苗免疫后抗体效价的测定中发现,用单一毒株的病毒抗原制备包被载体,对不同毒株疫苗接种后的抗体检测的阳性率有较大的差别[2-3]。本试验的目的在于通过对国内不同毒株狂犬病疫苗抗原性的比较,优化适合的毒株和配比作为包被抗原,建立ELISA检测体系,使其适用不同株狂犬病疫苗免疫后抗体水平的检测。用国内上市销售的不同毒株狂犬病疫苗分别腹腔免疫NIH小鼠,获得各疫苗株的抗血清,用各疫苗株抗原包被酶联板,测定各自相应抗血清的效价,同时进行不同毒株之间的抗原抗体的交叉中和试验。在抗原差异性分析的基础上,将不同株狂犬病毒抗原按不同比例混合包被反应板,分别测定阳性抗血清,以RFFIT方法检测结果为标准,试验结果显示,采用狂犬病毒AG株与CTN-1株混合包被,配比浓度为4∶1时,检测结果与RFFIT法相关性最高。以混合抗原包被反应板,以狂犬病毒CVS株抗体标记辣根过氧化物酶,优化反应条件,建立竞争ELISA,用于狂犬病抗体的定量检测。实验表明,抗体测定的最佳线性范围在30～500mIU/ml之间,相关系数大于0.99;检测限度为30mIU/ml;精密性验证试验内及试验间变异系数(CV)在6.68%～7.84%之间,准确度验证,回收率在92%～99.75%之间;试剂置37℃考核三天,与4℃保存试剂测定结果差别无统计学意义。本研究建立的竞争ELISA狂犬病抗体检测系统,与宁波天润生物药业有限公司人狂犬病病毒IgG抗体测定试剂盒(酶联免疫法)对65份血清做平行检测,两者结果的Kappa值为0.844,具有良好的一致性。与郑州安图绿科生物工程有限公司的人狂犬病病毒IgG抗体定量测定试剂盒(酶联免疫法)对100份狂犬病毒抗体阳性血清做平行定量检测,两者结果的Kappa值为0.135,线性相关系数为r= 0.753。为更好的验证本实验方法的适用性,选择112份不同效价狂犬病毒抗血清及阴性样本与RFFIT方法做平行比较,Kappa值为0.530,经过回归分析,回归方程为?=-0.475+3.246X;相关系数r=0.801,P<0.001,说明两者定量线性相关性较好。