【摘 要】
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牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus IBRV),主要引起牛的一种急性、热性、接触性传染病,主要表现出高热、呼吸困难、鼻炎和上呼吸道炎症,给养牛
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牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus IBRV),主要引起牛的一种急性、热性、接触性传染病,主要表现出高热、呼吸困难、鼻炎和上呼吸道炎症,给养牛业带来极大的经济损失。牛传染性鼻气管炎在欧洲流行迅速很难控制。本试验的主要目的是以牛传染性鼻气管炎ge基因的原核表达产物为抗原建立IBRV抗体间接ELISA检测方法。通过用生物软件设计出IBRV gE基因引物序列,随后用PCR扩增基因,并构建了 Pcold-TF-gE原核表达体系。对重组蛋白gE诱导表达,以上清形式存在。经Westen blot检测证明重组表达产物能被IBRV标准阳性血清特异识别。以纯化鉴定成功的表达产物为抗原以1μg/mL包被酶标板,以HRP兔抗牛为二抗,TMB显色时间为15min。结果显示:其临界值为0.369,特异性试验表明:该方法与口蹄疫、牛病毒性腹泻、副结核、布氏杆菌、支原体等阳性血清均无交叉反应。敏感性试验结果表明:牛阳性血清稀释比例均达到1:4096表明具有很好的敏感性。通过对5份IBRV阳性血清进行板间和板内试验结果重复性较好。利用建立的gE-ELISA方法,同时和IDEXX(IBR)抗体检测试剂盒对200份临床阳性血清进行检测比较,符合率均达到95%。所以该方法特异敏感高效,可用于牛传染性鼻气管炎血清抗体的检测,为IBRV诊断试剂盒奠定基础。
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