白芍总苷对系统性红斑狼疮患者外周血B细胞内TLR9表达和IFN-α分泌的影响

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目的:了解白芍总苷(TGP)对系统性红斑狼疮(SLE)患者和正常健康人外周血单个核细胞中B淋巴细胞内TLR9的表达及IFN-α分泌的影响。方法:选取SLE患者60例(SLE组)和正常健康人30例(对照组),抽取外周静脉血约20ml.,分离外周血单个核细胞,再分为5组体外培养。SLE组分为:A组为空白对照组;B组加入CpG-ODN;C组加入CpG-ODN和抑制性-ODN;D组加入CpG-ODN和TGP;E组加入TGP。按照上述方法将健康对照组分为:a组、b组、c组、d组和e组。各组均培养48小时后提取细胞及培养上清液,应用流式细胞仪检测培养后各组外周血CD19+B淋巴细胞内TLR9表达,用ELISA方法检测PBMC培养上清中IFN-α的浓度,分别比较各组之间TLR9的表达及IFN-α的分泌有无差异;借助于SPSS13.0软件进行统计学处理,α取0.05。结果:⒈各组TLR9表达情况:①A组9.20±3.43(%),B组14.86±3.42(%)高于,C组10.73±3.98(%),D组11.95±3.63(%),E组9.47±3.34(%),B组高于A组和C组,差异均有统计学意义(p<0.001,p=0.007),D组低于B组,差异有统计学意义(p=0.038);而平均荧光强度(MFI)各组间均没有明显差异。②按SLEDAI评分分为轻度活动组与中重度活动组,轻度活动组中,A组5.19±2.05(%),B组10.74±3.17(%),C组5.93±1.86(%),D组7.87±2.46(%),E组5.65±2.13(%),B组高于A组和C组,差异均有统计学意义(p=0.026,p=0.040);在中重度活动组中,A组10.80±2.37(%),B组16.51±1.72(%),C组12.65±2.73(%),D组13.59±2.58(%),E组11.10±2.34(%),B组高于A组和C组,差异均有统计学意义(p<0.001,p<0.001),D组低于B组,差异有统计学意义(p=0.008);③a组4.96±2.11(%),b组9.10±2.12(%),c组6.27±1.77(%),d组6.98±2.10(%),e组5.43±1.60(%),b组高于a组和c组,差异均有统计学意义(p=0.002,p=0.012);平均荧光强度(MFI):b组高于a组,差异有统计学意义(p=0.048),c组高于a组,差异有统计学意义(p=0.018)。⒉IFN-α的分泌情况:各组体外培养后IFN-α的分泌情况为:①A组4.83±0.53(μg/ml),B组6.98±0.21(μg/ml),C组5.04±0.50(μg/ml);D组5.21±0.47(μg/ml),E组1.14±0.17(μg/ml),B组高于A组和C组,差异均有统计学意义(p<0.001);D组低于B组,差异有统计学意义(p<0.001),E组低于A组,差异有统计学意义(p=0.004)。②将SLE患者组按SLEDAI评分分为轻度活动组与中重度活动组,所得的结果与上面一致;③a组1.42±0.21(μg/ml),b组4.72±0.64(μg/ml),c组1.64±0.22(μg/ml),d组1.91±0.18(μg/ml),e组1.14±0.17(μg/ml),b组高于a组和c组,差异均有统计学意义(p<0.001),d组低于b组,差异有统计学意义(p<0.001),e组低于a组,差异有统计学意义(p=0.048)。结论:在SLE患者和正常人体外研究中,刺激性CpG-ODN可以使PBMC中B淋巴细胞内TLR9的表达上调及细胞中IFN-α的分泌增加;抑制性-ODN可抑制CpG-ODN的免疫刺激作用,从而抑制细胞内TLR9的表达。TGP可以减弱CpG-ODN对TLR9的表达上调作用,减少其下游产物IFN-α的分泌。
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