当前抗生素在畜牧业的合理使用问题是一个热门话题。抗生素滥用的主要危害是会导致耐药菌或称超级菌在环境中比例的增加,而目前抗生素是保障人类健康不可替代的重要药物,所以环境中耐药菌或超级菌的产生会对人类健康带来严重的威胁。欧盟和美国等发达国家近年都制定了限制抗生素在畜牧业中使用的相关制度或法规。在我国养猪生产中,抗生素的使用主要是作为促生长剂和疾病治疗与预防控制两个方面,生产中存在不合理使用抗生素的情况。在养猪生产中作为促生长剂添加在饲料中的抗生素到底有多少效果,在法规限定的添加剂量内各种抗生素如何配伍促生长效果最好?抗生素添加后对猪的粪便微生物会产生多大影响,对粪便中微生物的抗性基因是否有影响?这些都是当前值得研究的重要课题。四环素类抗生素作为广谱抗生素对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有很强的抑制作用。由于其良好的抗菌活性和无明显是毒副作用,被广泛地用于畜牧生产中。金霉素作为其中重要的一员,也有良好的抗菌活性和促生长作用。早前的研究表明,金霉素能够促进仔猪生长,改善仔猪肠道的菌群结构,同时金霉素的长期使用也会使仔猪粪便微生物中四环素类抗性基因的丰度升高。本文主要探索作为促进生长作用的低剂量的金霉素(75ppm,低于治疗剂量)添加及其与其他抗生素或中药提取物的配伍添加对断奶仔猪的生长性能和粪便微生物丰度与多样性的影响,以及对粪便微生物中四环素类抗性基因的影响。本试验随机选取400头健康的35日龄断奶仔猪(杜×长×大),随机分为8组,每组3个重复(栏),每个重复(栏)16-17头仔猪。CT组:为对照组,饲喂基础日粮(不添加任何抗生素);CTC组:添加75mg/kg金霉素;BC组:添加40mg/kg杆菌肽锌和20 mg/kg硫酸粘杆菌素;CBC组:添加75 mg/kg金霉素、40 mg/kg杆菌肽锌和20 mg/kg硫酸粘杆菌素;CS组:添加75 mg/kg金霉素和50 mg/kg博落回提取物;CO组:添加75 mg/kg金霉素和100 mg/kg喹乙醇;COE组:75 mg/kg金霉素、100 mg/kg喹乙醇和20 mg/kg恩拉霉素;COV组:75 mg/kg金霉素、100 mg/kg喹乙醇和15 mg/kg维吉尼亚霉素。试验第28天,每组随机选取15头仔猪(共120头)采集血液样品,每组随机选取9头仔猪(共72头)采集新鲜粪便样品。试验分为三部分:1抗生素的添加对断奶仔猪的生产性能和免疫指标的影响本试验旨在研究低剂量的抗生素添加对断奶仔猪生长性能(平均日增重ADG、平均日采食量ADFI和料重比F/G)和免疫指标(IgG、IgM、IgA、IL-12和IFN-γ)的影响。试验结果表明,试验猪群健康状况良好,各组腹泻率在0.05%-3.04%。抗生素的低剂量添加对仔猪腹泻率无显著影响(P>0.05),对断奶仔猪的平均日增重、平均日采食量和料重比影响不显著(P>0.05),其中CS组(金霉素和博落回提取物配伍)日增重最高,BC组(杆菌肽锌和硫酸粘杆菌素配伍)最低,二者之间差异显著(P<0.05)。抗生素的低剂量添加降低了断奶仔猪血清中多个免疫指标(IgG、IgM、IgA、IL-12和IFN-γ)的浓度(P<0.05),但都在正常值范围内。总之,低剂量的抗生素添加对于断奶仔猪的生长性能影响不显著,却降低了血清中的免疫球蛋白和细胞因子等多个免疫指标的浓度,但均在正常值范围内。2抗生素的添加对断奶仔猪粪便微生物的种类和丰度的影响本试验利用16S rRNA高通量测序技术分析了不同抗生素配伍添加对仔猪粪便微生物的种类和丰度的影响。结果表明:在7个试验组中,与对照组相比,金霉素、喹乙醇与恩拉霉素,或金霉素、喹乙醇与维吉尼亚霉素霉素的配伍添加减少了的仔猪粪便微生物的多样性(P<0.05),其余5个组的粪便微生物多样性与对照组相比差异不显著(P>0.05)。上述两种抗生素配伍添加,在门水平上极显著提高了拟杆菌门Bacteroidetes的丰度;在属水平上极显著提高了普氏菌属Prevotella的丰度。总之,抗生素的低剂量配伍添加对断奶仔猪粪便微生物种类和丰度的影响有限,7个抗生素配伍添加组中只有2个组对粪便微生物的多样性有显著影响。3抗生素的添加对断奶仔猪粪便微生物抗性基因的影响本试验利用荧光定量PCR技术分析了低剂量的抗生素添加对仔猪粪便微生物的四环素类抗性基因(TRGs)丰度的影响。结果显示,本研究检测的6种TRGs基因(tetA、tetC、tetL、tetO、tetW和tetX)的相对丰度在1.5×10-4到2.0×10-1之间。说明TRGs基因广泛存在于猪粪便微生物中并有较高的背景丰度。与对照组相比,28天的低剂量抗生素添加增加了大部分TRGs基因的丰度;与金霉素的单独添加相比,金霉素与其他抗生素的配伍添加能够有效地抑制部分TRGs基因丰度的升高。总之,抗生素的低剂量配伍添加提高了断奶仔猪粪便微生物抗性基因的丰度,但金霉素与其他抗生素合理的配伍添加可以抑制部分TRGs基因丰度的升高,起到保护环境的作用。综上所述,与对照组(不添加任何抗生素)相比,金霉素及其与其他抗生素或中药提取物的低剂量(75ppm)配伍添加对断奶仔猪的生长性能影响不显著,其中金霉素和博落回提取物组日增重最高,杆菌肽锌和硫酸粘杆菌素最低,这二者差异显著。抗生素的添加还降低了血清中的免疫球蛋白和细胞因子浓度,但都在正常值范围内;抗生素的添加对粪便微生物的丰度与多样性的影响有限,与对照组相比,7个试验组中仅有2个组有显著变化。28天低剂量的金霉素添加增加了断奶仔猪粪便微生物中大部分四环素类抗性基因的丰度,但金霉素与其他抗生素合理的配伍添加可以抑制部分TRGs基因丰度的升高。这些结果提示,当前低剂量的抗生素或抗生素配伍添加对于健康状况较好的猪群的促生长作用不明显,对猪粪便微生物种类和丰度的影响也有限,但抗生素的合理配伍添加可以减缓抗生基因丰度的升高。