乌药中挥发油及生物碱成分的分离分析方法研究

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乌药作为我国的传统中药材,以产自浙江天台地区为道地药材,素有天台乌药之称,具有广泛的药理活性,其活性成分主要为挥发油、生物碱和呋喃倍半萜及其内酯三大类。目前国内外研究主要集中于呋喃倍半萜及其内酯,而对于挥发油和生物碱类成分的研究相对较少。研究表明乌药中的挥发油成分具有抗菌,抗肿瘤以及调节肠胃功能等作用,生物碱成分具有抗炎,抗氧化以及抗癌等作用。然而乌药中挥发油及生物碱的成分复杂,且含量较低,利用传统的分离分析方法效率不高。本论文采用气质联用技术,液质联用技术及高速逆流色谱技术等现代分离分析方法,针对天台乌药中的挥发油及生物碱成分进行研究。研究内容和结果如下:1、采用传统的蒸馏法提取天台乌药中的挥发油成分,分别考察浸泡时间,料液比,提取时间对提取效果的影响,得到最优提取工艺为:浸泡时间3h,液料比12mL/g,提取时间3h。研究建立了乌药挥发油化学成分的气质联用分析方法,通过标准谱库检索并与相关文献进行比对,确定了挥发油中的39个化学成分。结果表明此方法分析速度快,且对含量较低的挥发性成分也有较好的分析效果,适用于天台乌药中挥发油成分的分析。2、采用超声辅助溶剂法提取天台乌药中的有效成分,通过酸水碱化处理,再经萃取得到生物碱提取物。通过优化流动相、流速等参数,建立天台乌药中生物碱类化合物的高效液相色谱分析方法。在此条件下建立液质联用快速分析方法,根据高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱获得的精确分子量确定化合物的分子式,再经过二级质谱得到的结构碎片进行解析,分析鉴定了天台乌药生物碱提取物中的6个化合物分别为深山黄堇碱、降波尔定碱、前荷叶碱、去甲异波尔定、波尔定碱和网脉番荔枝碱,并在此基础上总结天台乌药中异喹啉类生物碱的质谱裂解规律。实验结果表明该方法灵敏度高,分析速度快,特别适用于天台乌药中的微量生物碱类化合物的快速筛选与检测。3、研究建立了天台乌药中生物碱类化合物的高速逆流色谱分离方法。采用正丁醇-乙酸乙酯-0.5%乙酸(4:1:5,v/v)为两相溶剂体系,一次性从400mg生物碱提取物中分离得到28.6mg去甲异波尔定和7.2 mg波尔定碱,纯度分别为95.27%和93.61%。通过核磁共振技术确证了两个化合物单体的化学结构。实验结果表明高速逆流色谱法分离得到的单体化合物纯度较高,具有分离效率高,制备量大等优点,是一种高效的制备型分离方法,适合用于天台乌药中生物碱类化合物的分离纯化。
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