血小板衍化生长因子对牙髓和牙周组织细胞生物学作用的基础研究

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牙髓、牙周病的治疗在口腔内科学中是一个重要的课题,而如何促进牙髓、牙体硬组织以及牙周组织的生理性修复和再生是该课题的中心环节。随着分子生物学技术的飞速发展,对血小板衍化生长因子(PDGF)的理化性质、生物学效应、作用机制及在创伤修复中的重要作用有了深入的了解。为了探讨能否将PDGF引入口腔内科的治疗学中,以开辟一条治疗牙髓、牙周病的新途径。本文从牛血小板中纯化了bPDGF,对其理化性质、生物学活性进行研究分析,了解bPDGF对人牙髓、牙周膜成纤维细胞的生物学效应及PDGF特异性受体在牙髓、尖周肉芽组织中的表达和分布,利用动物创伤模型研究bPDGF的体内活性和在创伤修复中的作用,为PDGF在牙髓、牙周病中的治疗学研究提供新的实验依据。一、bPDGF的提取、纯化与理化性质分析研究 采用酸醇抽提、离子交换吸附和凝胶层析方法,从新鲜牛血小板中提取、纯化bPDGF,以处于静止状态BALB/c 3T3细胞的DNA合成检测bPDGF的活性,并利用生物化学方法对其理化性质进行分析。结果显示:bPDGF的收率为3%,纯化倍数达7880倍;SDS-PAGE显示bPDGF分子量为2.78×10~4u~3.17×10~4u,纯度为91.8%,经2-巯基乙醇还原后解离为两条分子量分别是1.39×10~4u、1.59×10~4u的亚基;HPLC显示bPDGF的分子量为2.7×10~4u,纯度达86.34%:bPDGF的pI为9.6~10;氨基酸组成分析表明bPDGF含有17种不同量的氨基酸;5ng/mlbPDGF可刺激处于静止状态的BALA/c 3T3细胞 NDA的合成,30ng/ml浓度使细胞DNA合成达最高峰并在24h最为显著,热处理对其致丝裂活性无影响,而经2-巯基乙醇处理后其活性丧失。提示:纯化的bPDGF是较高纯度的制剂,与人PDGF的理化性质基本相同,是一种强阳离子多肽,含有较多的碱性氨基酸,耐热、耐酸和2%SDS,是由二硫键
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