着床是一个复杂的生物学过程。雌激素对于这一过程的实现起着十分重要的作用，它不仅可以促进子宫内膜着床窗口的开放，同时还促进囊胚的激活，使囊胚能够与子宫内膜相互作用，从而使着床过程得以实现。Paria等利用延迟着床模型研究发现，雌鼠交配后被去除卵巢，如仅给予孕激素，小鼠胚胎处于静止状态，一直游离于宫腔内，但一旦给予雌激素，囊胚能够快速附着并植入子宫内膜，据此我们推测雌激素对囊胚具有快速激活效应。然而，雌激素对囊胚的快速激活作用及其机制尚未得到研究。 传统的雌激素对靶细胞的作用是通过与胞浆或核受体结合产生的基因组效应而发挥作用。近年来，越来越多的研究证明，除了传统的基因组效应外，雌激素对多种细胞，如心肌细胞、神经细胞、精细胞等的作用还存在有快速的非基因组效应。即首先通过与细胞膜的受体或特异位点结合之后，经跨膜信号传递的方式使胞内产生第二信使物质，进而导致细胞功能状态的改变。据报导，雌激素对许多细胞的快速非基因组效应都普遍存在胞内Ca<2+>迅速增加的现象，并由此进一步触发一系列的胞内事件，因此，在国内、外所进行的雌激素快速非基因组效应的研究中，钙离子常被作为一个重要的信号分子而受到关注。为此，本课题拟进行以下研究：第一，为证明雌激素对囊胚细胞的快速激活作用，拟采用钙离子荧光探针fluo-3/AM标记囊胚细胞内钙离子，然后用激光共聚焦扫描显微镜连续检测17β-雌二醇(17β-E<,2>)作用所致囊胚细胞胞内钙离子浓度随时间的动态变化。第二，为进一步探讨雌激素对囊胚细胞的快速激活作用的机制，拟采用钙离子荧光探针fluo-3/AM标记囊胚细胞内钙离子，然后用荧光显微镜检测偶联牛血清白蛋白的17β-雌二醇(E<,2>-BSA)所致囊胚细胞胞内钙离子浓度的改变，以及在去钙M2液、传统雌激素受体阻断剂tamoxifen和磷脂酶C特异抑制剂U73122作用后17β-E<,2>所致囊胚细胞内钙离子浓度的变化；采用细胞免疫荧光方法检测17β-E<,2>作用前后囊胚细胞内磷酸化磷脂酶C(p-PLC)的含量。 实验结果如下： 一、雌激素作用于静止状态小鼠囊胚细胞，在几分钟内便能够诱导囊胚细胞内游离钙离子浓度升高。 二、偶联大分子非透膜牛血清白蛋白的雌激素同样能够诱导静止状态小鼠囊胚细胞胞内游离钙离子浓度的增加，该效应不被传统的雌激素受体阻断剂所阻断，且不依赖于胞外钙离子的内流，而磷脂酶C特异性抑制剂可明显抑制该效应：雌激素作用于静止状态小鼠囊胚细胞后，囊胚细胞内磷酸化磷脂酶C的含量明显增加。 结论：雌激素对静止状态小鼠囊胚具有快速激活作用，这种快速激活作用可能是雌激素通过与膜受体或结合位点结合后，激活受体-PLC-IP3信号通路致胞内钙离子释放而实现的。