前言 近年来随着超低体重儿存活率的不断提高，慢性肺疾病(Chronic Lung Disease CLD)逐年增多，其发病率据国外报道已达30％～40％，严重影响儿童的生存质量，且无有效的治疗方法。因其发病机制仍不清楚，因此，揭示发病机制才有可能防治本病及阻断发病。目前研究提示：慢性肺疾病由多种因素引起，如细菌、病毒及某些理化因素，吸人高浓度氧和机械通气都是导致慢性肺疾病的高危因素。 自1967年Northway发现在早产儿有氧机械通气时出现肺损伤、导致慢性肺疾病做了首次报道后，Bancalari等研究表明，早产儿肺组织酶系统发育不完善以及需要的营养摄入少、代谢能力差等均是导致慢性肺疾病的重要原因，但最主要的原因是高氧和机械通气，机械通气治疗早产儿RDS时间超过3天时，胎龄越小越易发生CLD。高氧导致CLD的主要原因是由于氧毒性作用，当未成熟肺暴露于高氧状态下，大量氧自由基产生，超过机体消除能力，表现为进行性肺损伤。目前研究认为：肺泡发育不良和胶原排列紊乱是CLD的特点。在肺组织损伤后修复过程中，成纤维细胞是起主要作用的细胞，而血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor PDGF)是刺激成纤维细胞分裂、增殖的重要因子，最初是从血小板alph-粒子纯化出来的结缔组织生长因子，分子量为28000～31000，是在1974年以来被认识的一种刺激细胞增殖的肽类生长因子。由于早产儿肺组织不易获取，因此，研究人员采用早产鼠模型来观察PDGF的动态变化。PDGF在正常胎肺发育过程中的动态变化，已有报道，国外研究表明：PDGF与PDGFR在肺发育过程中起到介导整个肺器官生长的作用，其动态变化与肺发育阶段有关，主要影响上皮细胞的生长、细胞的分化，也与呼吸道上皮出现或控制肺血管形成有关。PDGF在高氧致早产鼠CLD中的变化需进一步研究。 本实验拟通过高氧致早产鼠CLD模型，观察肺组织的形态学变化，应用免疫组织化学方法，研究吸人高浓度氧的时间长短对PDGF-BB及PDG-FR-β表达的影响，探讨PDGF-BB及PDGFR-β在高氧致早产鼠慢性肺疾病方面的可能机制，为早产儿慢性肺疾病的预防和治疗做探索性研究。研究方法 采用清洁级大鼠80只，以雌:雄比例为4:1合笼交配后，孕21天剖腹产得早产鼠105只，随机分两组，实验组即高氧组55只，正常对照组即空气组50只，高氧组早产鼠放人高浓度氧气中(Fio:)90%温度23一25℃)，正常对照组放在同一室内空气中，氧气浓度(FIO:=2l.%)，其他实验条件及控制因素同实验组，分别于实验满1、3、7、14和21天，每组各处死5只早产鼠，取出肺组织，做HE染色和免疫组化染色，镜下观察肺组织的形态学变化，在每个切片上观测5个不重复高倍视野(400X)，应用显微图像分析系统(型号MetaM0rp丫C一5050/BX41生产厂UIC/OLYMPUS Us/JP)，分析处理图像，作PDGF一BB及PDGFR一p的半定量分析，各组数据以均数土标准差(又士s)表示，用SPSSIO.O软件进行统计学方差分析，应用t检验做两组间及实验组内相邻两时间点的分析比较，P<0 .05有统计学意义。实验结果 一、肺组织形态学改变 在光学显微镜下可见:实验组第1天肺组织形态学无明显改变;第14天肺泡数量减少，少数肺泡融合，肺间质细胞增加;第21天正常肺泡结构消失，肺泡数量明显减少，直径明显增大，肺泡壁变薄，含气空腔增大，且有大量肺泡融合，肺间质细胞明显增加，与人类CLD病理结构基本一致。对照组的肺组织无间质纤维化、炎症反应和肺泡增大改变。 二、肺组织PDGF一BB及PDGFR一p的蛋白表达 1 .PDGF一 BB阳性反应物的表达和半定量分析: PDGF一BB阳性反应物为棕黄色，定位于胞浆，阴性对照组的肺组织切片无明显棕黄色物质出现;实验组中第1、3天，肺组织无或偶有少量细胞表达，与对照组比较均无明显差异性(P>0.05);第7天、第14天和第21天肺组织有PDGF一BB表达，与对照组比较明显升高(P<0 .05)，有显著差异性，第21天PDGF一BB表达稍下降，与对照组比较(P<0.05)，仍有显著差异性。 2.PDGFR一日阳性反应物的表达和半定量分析 阴性对照组中肺组织切片无明显棕黄色物质出现;实验组中第1天、3天，肺组织无或偶有少量细胞表达，与对照组比较无明显差异性(P>0.05);第7天、第14天和第21天肺组织有PDGFR一p表达，与对照组比较均明显升高(P<0.05)，有显著差异性，第21天肺组织PDGFR一p表达比第14天稍下降，与对照组比较仍明显高(P<0.05)，有显著差异性。 3.PDGF一BB的动态变化 实验组中第3天与第1天比较无显著差异性(P>0.05)，第7天与第3天比较有显著差异性(P<0.05)，第14天与第7天比较无显著差异性(P>0.05)，第21天与第14天比较无显著差异性(P>0.05)。说明从第7天起PDGF一BB显著升高，并保持在较高水平。 4.PDGFR一p的动态变化 实验组中第3天与第1天比较无显著差异性(P>0.05)，第7天与第3天比较有显著差异性(P<0.05)，第14天与从第7天比较无显著差异性(P>0.05)，第21天稍下降，与第14天比较无显著差异性(P>0.05)。说明第7天起PDGFR一p显著升高，并保持在