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植物体内所含micro RNA长度约为22nt,是具有基因表达调控作用的非编码类RNA。其中,mi R398靶向Cu/Zn过氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase,CSD)基因,直接参与胁迫应答网络。在植物光合作用和呼吸作用过程中产生的副产物活性氧(Reactive oxygen species,ROS)对植物细胞生长具有毒害作用,而过量ROS的积累主要是由于植物受到盐害、重金属、冷害、机械伤害等多种胁迫所导致的。而活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的清除主要依靠CSD,其可将ROS转变成H2O2和O2。盐害和重金属是影响人参生长发育的主要因素,为此本实验进行了人参mi R398和靶基因CSD在高盐和高铜胁迫条件下的相对表达水平变化的研究,并通过将构建的mi R398 sponge元件导入人参基因组内以达到“吸附”mi R398的目的,抑制mi R398对靶基因CSD基因的沉默作用,提高CSD基因的相对表达水平,进一步提升植株抵抗盐害和重金属胁迫的能力。具体实验结果如下:1.通过CTAB法提取人参总RNA,利用自主设计合成的颈环RT引物反转录合成c DNA,并将PCR扩增产物连接至克隆载体p MD18-T,转化至感受态大肠杆菌JM109中,提取质粒进行测序,获得了人参mi R398序列,并将测序结果提交Gen Bank,登录号为KM922596;2.在高盐和高铜胁迫条件下,人参发根体系中mi R398和靶基因CSD表达水平都发生了相对变化,mi R398表达水平在以上胁迫条件下表达水平明显下降,确定了人参中mi R398表达水平变化与胁迫响应的关系,CSD基因的表达水平在胁迫条件下得到了不同程度的提高,确定了人参中mi R398与CSD基因的负调控关系;3.设计构建p BI121-398S表达载体,以达到特异性“吸附”mi R398,以达到降低其表达水平的目的,然后经测序验证后转入A4工程菌,以进行人参发根遗传转化,获得人参发根体系hairy-p BI121-398S;4.通过实时定量PCR检测了人参发根体系hairy-p BI121-398S中mi R398和靶基因CSD的相对表达水平变化,mi R398相对表达水平下降约40%,靶基因CSD相对表达量得到了提高,揭示了mi R398sponge元件在人参中的“吸附”作用,抑制了mi R398对靶基因CSD基因的沉默作用,提高了CSD基因的相对表达水平;5.检测发根体系hairy-p BI121-398S的生长速度,其生长速度高于对照组;并通过香草醛比色法测定发根系中总皂苷含量的变化,其总皂苷含量相对于对照组人生发根体系hairy-p BI121-GUS升高约9%。