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[目的]探讨原代培养及纯化后的结肠癌相关成纤维细胞(cancer associatedfibroblast,CAF)对结肠癌细胞增殖及侵袭能力的影响,为研究癌细胞微环境在结直肠癌发生发展过程中的作用,并进一步用于结直肠癌的预防及寻求新的治疗途径而奠定基础。[方法]采集手术切除结肠腺癌及正常结肠粘膜标本进行原代培养,电镜及免疫组化初步分析鉴定,获得纯化的结肠CAF及结肠粘膜正常成纤维细胞(Normalfibroblast,NF)进行传代培养。分别利用CAF及NF条件培养基培养HCT-116细胞,用无血清培养基培养HCT-116细胞作为对照,通过MTT法检测HCT-116细胞株的增殖能力的变化(A组);利用Transwell小室,建立CAF及NF与结肠癌细胞HCT-116细胞株间接共培养模型,同时用10%完全培养基培养HCT-116细胞作为对照,观测在CAF及NF作用后的HCT-116细胞形态学改变,利用流式细胞仪分析HCT-116细胞的增殖周期(B组);再以Matrigel胶模拟重建基底膜,观测CAF对HCT-116细胞侵袭能力的影响(C组)。[结果]培养纯化的结肠CAF较NF异型性明显,生长活跃,接触抑制和密度抑制丧失,结肠CAF及NF广谱角蛋白均表达阴性,波形蛋白阳性,CAF的α-SMA表达阳性,NF则阴性,CAF见肌丝等超微结构,而NF除线粒体丰富外未见明显肌丝结构;间接共培养模型提示结肠CAF对HCT-116细胞的形态学变化不明显;CAF条件培养基培养的HCT-116细胞增殖活性增高,MTT实验显示24h、48h、72h时CAF条件培养基组的HCT-116增殖活性与其余两组相比差异均有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪分析结果表明,CAF间接共培养的HCT-116,G2期和S期的细胞所占比例较NF间接共培养组和10%完全培养基培养组均明显升高,差别有统计学意义(P<0.05)。侵袭实验CAF作用下的HCT-116细胞侵袭能力明显增强,与其他两组相比,差别均有统计学意义(P<0.05)。[结论]1.建立原代培养的结肠癌相关成纤维细胞(CAF)和结肠粘膜正常成纤维细胞(NF)模型,为进一步研究结肠癌细胞微环境对结肠癌发生发展中的作用、机理的研究、结肠癌预防和寻求新的治疗途径创造了条件;2.CAF具有促进结肠癌细胞HCT-116增殖及增强其迁移侵袭的能力;3.CAF条件培养基中可能存在一些可溶性活性物质具有促进HCT-116细胞增殖及侵袭能力的作用。