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本文考察了二甲基亚砜(DMSO)对重组CHO细胞生长和乙肝表面抗原(HBsAg)生产的影响,并采用实时荧光定量PCR的方法,从基因水平、转录水平、mRNA稳定性等方面对DMSO刺激蛋白质生产的机理进行了分析。
DMSO抑制了细胞的生长,但对HBsAg的表达具有刺激作用。1.5﹪DMSO作用下,细胞密度比对照降低了35﹪,但是分泌到胞外的HBsAg提高了80﹪,并且胞内积累的HBsAg高达9倍。
用实时荧光定量PCR的方法测定了HBsAgmRNA的变化,1.5﹪DMSO作用下HBsAgmRNA提高了2.5倍。HBsAg的基因拷贝数不受DMSO作用的影响,每个细胞的HBsAg基因拷贝数约为550个。HBsAgmRNA的稳定性也不受DMSO作用的影响,1.5﹪DMSO作用下HBsAgmRNA的半衰期为5.58h,对照为5.36h。通过体外核转录方法分析了HBsAg的转录速率,1.5﹪DMSO作用下HBsAg基因的转录速率比对照提高了80﹪。由此可以证明,DMSO通过提高HBsAg基因的转录速率,提高了胞内HBsAgmRNA的水平,进而提高了HBsAg的生产。