ETS基因在肿瘤细胞中的表达及药物干预

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ETS家族在肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用,深入了解研究ETS家族及其对靶基因的调控机制,阐明ETS家族相关基因在肿瘤发生发展中的作用,可从分子水平为肿瘤的诊断治疗提供新的理论依据和策略方法,本论文主要研究内容如下:   第一部分:ETS基因在白血病细胞中的表达   目的:   测定转录因子ETS家族基因在不同白血病细胞系的表达,探索ETS家族相关基因在白血病中所起的作用。   方法:   实时定量PCR方法测定ETS1、ETS2、ERG和FLI1mRNA在不同亚型的白血病细胞系Eol-1、HEL、THP-1、KG-1和HNT-34中的表达。   结果:   ETS1生HEL细胞系中表达最高,在Eol-1细胞系中表达最低;HNT-34、HEL、Eol-1、KG-1和THP-1细胞由高到低表达ETS2;ERG拷贝数由高到低为HNT-34、KG-1、HEL、Eol-1和THP-1细胞;FLI1在HNT-34、Eol-1、HEL、KG-1和THP-1细胞系中由高到低表达。   结论:   不同亚型的白血病细胞系中ETS家族中的ETS1、ETS2、ERG和FLI1mRNA表达水平明显不同,表明ETS家族成员在不同亚型的白血病中所起的作用可能不同。   第二部分:ETS基因在胰腺癌细胞中的表达及药物干预   目的:   探讨磁性纳米四氧化三铁颗粒(magneticnanoparticlesofFe3O4,MNP-Fe3O4)对藤黄酸(gambogicacid,GA)诱导的胰腺癌Capan-1细胞凋亡及对Panc-1细胞中ETS1表达的影响,为临床胰腺癌的治疗提供一定的理论依据。   方法:   四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析单独及联合应用MNP-Fe3O4和GA对Capan-1和Panc-1细胞的细胞毒作用,普通光学显微镜下观察药物作用前后细胞的形态特征;4,6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)荧光染色研究单独及联合应用MNP-Fe3O4和GA后Capan-1细胞的凋亡特征;WesternBlot检测Bax、Bcl-2、Caspase9和Caspase3的蛋白表达水平,阐明其诱导凋亡分子机理;WesternBlot检测单独及联合应用MNP-Fe3O4和GA后Panc-1细胞的ETS1、CyclinD、U-PA、VEGF表达水平的变化,。   结果:   MNP-Fe3O4对胰腺癌Capan-1和Panc-1细胞无明显细胞毒作用;GA对Capan-1和Panc-1细胞具有抑制作用,且呈浓度依赖性;较单独应用GA,联合应用GA和MNP-Fe3O4明显抑制Capan-1和Panc-1细胞增殖;DAPI染色法表明Capan-1细胞呈明显凋亡状态;联合GA和MNPs-Fe3O4作用于Capan-1细胞,Bax、Caspase9、Caspase3蛋白表达明显上调,Bcl-2蛋白表达明显下调,与单用GA相比差异有统计学意义;联合应用GA和MNPs-Fe3O4显著抑制Panc-1细胞迁移能力、下调ETS1、CyclinD1、u-PA、VEGF的蛋白表达水平。   结论:   MNP-Fe3O4协同GA上调胰腺癌Capan-1细胞Bax、Caspase9、Caspase3,下调Bcl-2,诱导细胞凋亡;并可调控Panc-1细胞中转录因子ETS1表达,抑制肿瘤增殖、侵袭、血管生成相关因子表达。因此,本实验为胰腺癌治疗提供了一种新思路、新方法。
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