成人结膜干细胞定位的免疫组织化学研究 目的 眼表存在两类干细胞,即分为角膜上皮干细胞和结膜上皮干细胞,它们属于单能干细胞。目前对角膜上皮干细胞的基础研究和临床应用已取得了丰硕成果,而对于结膜干细胞的研究尚处于起步阶段。 由于各种原因引起的结膜上皮严重破坏、结膜功能部分或全部破坏、杯状细胞丧失等改变造成睑球粘连、粘蛋白缺乏、干眼等眼表疾病,极大影响了患者的生活质量,而结膜重建是恢复眼表正常结构和生理的有效手段。进一步研究结膜干细胞的确切定位及生物学特性、体外分离培养结膜干细胞、用组织工程构建生物结膜是结膜干细胞的研究方向。 本实验利用免疫组织化学方法对细胞角蛋白K7、K14、K19及MUC5AC、P63、PCNA、AE5在不同细胞中的特异性表达进行观察,根据这些标记物在成人结膜上皮细胞中的不同部位的表达情况和分布情况,推断成人结膜上皮干细胞的定位特征。 方法 1.材料及组织标本制备获取角膜移植供者的睑球结膜组织,连眼睑取出完整睑球结膜,除去皮肤及皮下软组织(睑缘保留),沿眼球矢状面剪取眼球组织块(呈窄条状,包含全部睑结膜、球结膜、穹隆部结膜及睑结膜与皮肤交接处),40g/L多聚甲醛固定,常规石蜡包埋,将组织蜡块制成3-5μm的切片。SP免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒、CK7单克隆抗体、CK14单克隆抗体、CK19单克隆抗体、P63单克隆抗体、MUC5AC单克隆抗体、PCNA单克隆抗体、AE5单克隆抗体等均购自福州迈新生物技术开发有限公司。 2.免疫组织化学取相应切片按免疫组化SP法进行染色,采用阴性对