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目的:本研究旨在探讨p38 MAPK4亚基(即p38α,p38β,p38γ和p38δ)在食管鳞癌细胞恶性行为中的作用,探讨p38α,p38β,p38γ和p38δ表达的临床病理学意义;在细胞水平分析p38α,p38β,p38γ和p38δ在细胞增殖,迁移,浸润,周期和凋亡中的作用;同时,构建p38γ和p38δ慢病毒干扰及过表达载体,流式细胞仪分选阳性细胞,皮下注射裸小鼠构建皮下荷瘤动物模型,观察p38γ和p38δ在体内成瘤中的作用。方法:运用免疫组织化学技术在食管鳞癌的组织芯片上检测p38β,p38γ和p38δ的表达水平,运用卡方统计学分析方法分析p38β,p38γ和p38δ表达的临床病理学意义(包括患者年龄,性别,临床分期,T分期,N分期,分化程度,肿瘤大小及大类型);同时,运用Kaplan-Meier生存曲线分析p38β,p38γ和p38δ表达水平与患者的总预后的统计学相关性。在体外食管癌细胞系Eca109中,针对p38α,p38β,p38γ和p38δ的cDNA序列,我们分别构建了短发夹RNA干扰载体(shRNA)和真核过表达载体,Lipofectamine 2,000转染Eca109细胞;运用western-blot检测所构建干扰或过表达质粒的转染效果;运用细胞划痕实验检测p38α,p38β,p38γ和p38δ干扰或过表达后食管癌细胞Eca109的迁移变化;运用Transwell实验检测p38α,p38β,p38γ和p38δ干扰或过表达后食管癌细胞Eca109的浸润变化;运用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化。最后针对研究相对较少的p38γ和p38δ,我们分别构建了其慢病毒干扰和过表达载体,转染Eca109细胞,建立了稳定转染p38γ稳定敲低和p38δ过表达的Eca109细胞系,并用流式细胞仪进行分选出阳性细胞。最后将流式细胞仪分选出阳性细胞,扩大培养,并且皮下注射裸小鼠,构建Eca109细胞皮下荷瘤小鼠模型,观察p38γ和p38δ基因在体内对肿瘤细胞增殖的影响。结果:第一部分:相比癌旁正常组织,p38α在食管癌组织中显著性高表达(P=0.000);其表达水平与临床病理学参数,如:年龄(P=0.436),性别(P=1.000),临床分期(P=0.514),T分期(P=0.429),N分期(P=0.646),分化程度(P=0.670),肿瘤大小(p=0.610)和大体类型(p=0.551)均不具有统计学相关性,与患者的总预后也不具有统计学相关性(p>0.05);相比癌旁正常组织,p38β在食管癌组织中显著性高表达,其差异具有统计学意义(p=0.000);且p38β表达与肿瘤大小具有统计学相关性(p=0.044)。但与其他临床病理学参数,如,性别(p=0.730),年龄(p=0.294),临床分期(p=0.118),t分期(p=0.692),n分期(p=0.109),分化程度(p=0.470)和大体类型(p=0.609)均不具有统计学相关性;p38γ在癌和癌旁组织中表达不具有统计学相关性(p=0.365),与性别(p=1.000),年龄(p=0.609),t分期(p=0.063),分化程度(p=0.0.093)和大体类型(p=0.315)等参数均无统计学相关性,但是与临床分期(p=0.017),n分期(p=0.008),肿瘤大小(p=0.017)具有统计学相关性;相比癌旁正常组织,p38δ在食管癌组织中显著性高表达,其差异具有统计学意义(p=0.000);但是p38δ的表达与其他临床病理学参数,如性别(p=1.000),年龄(p=0.603),临床分期(p=0.089),t分期(p=0.646),n分期(p=0.568),分化程度(p=0.791)和大体类型(p=0.575)均不具有统计学相关性。运用kaplan-meier生存曲线分析p38β的表达与食管癌患者的总预后具有统计学相关性(p=0.012),p38γ和p38δ的表达与患者总预后均无统计学相关性(p=0.667和p=0.364)。第二部分:在体外食管癌细胞系水平,我们发现干扰p38α,p38β,p38γ和p38δ亚基后,相比对照组p38α能够显著性地促进eca109的增殖,迁移和浸润;但是干扰p38β,p38γ和p38δ亚基后能够显著性地抑制eca109的增殖,迁移和浸润。转染真核过表达质粒后,表型则相反。流式细胞分析结果显示,相比对照组,干扰p38α后能够抑制能够显著性地抑制eca109的凋亡,周期s期显著性增加;干扰p38β,p38γ和p38δ亚基后能够抑制能够显著性地促进eca109的凋亡,周期s期显著性降低;转染真核过表达质粒后,凋亡和周期表型则相反。第三部分:皮下荷瘤小鼠模型结果显示,与对照组相比,p38δ亚基过表达后,在裸鼠皮下能够显著性的促进肿瘤生长;与对照组相比,而p38γ敲低后,在裸鼠皮下能够显著性的抑制肿瘤生长。提示p38γ和p38δ亚基均能促进体内食管癌细胞eca109细胞的增殖。结论:(1)在临床组织水平除了p38γ亚基在食管癌和癌旁组织中表达没有统计学差异外,其余三个亚基,即p38α,p38β和p38δ亚基均在食管癌组织中显著性高表达。临床组织水平结果提示p38γ与食管癌淋巴结转移相关;p38α,p38β和p38δ亚基与食管癌发生发展相关;(2)在体外食管癌细胞系水平,p38α起着抑制食管癌细胞恶性表型的功能;p38β,p38γ和p38δ亚基则起着促进食管癌细胞恶性表型的功能;(3)在体内裸鼠动物水平,p38γ和p38δ亚基在体内均能够促进肿瘤生长,起着促癌基因的作用。