伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的一种危害动物繁殖系统、神经系统的急性传染病。伪狂犬病病毒可感染多种哺乳动物,如猪、鼠、貉、水貂和狐等。2011年,我国多个省份的生猪养殖场暴发了PRV疫情,且此次流行的毒株导致Bartha疫苗株难以对猪群提供全面保护。该毒株不仅使猪群发病,还导致狐等毛皮动物发病。当狐感染PRV后,表现出神经性瘙痒、呼吸困难、精神狂躁或沉郁等临床症状,体温变化多表现为“回归热”,发病的狐多以死亡为转归,给养狐业带来巨大的经济损失。为更好的防控该病,通过对狐PRV的分离鉴定,以gB蛋白的原核表达和HRP酶标二抗的制备为基础,建立狐PRV间接ELISA检测方法,用于狐PRV抗体的检测。采集2017²018年间送检的疑似感染PRV的病死狐的脑组织样品30份,经PCR鉴定其中6份样品为PR阳性,阳性率为20%。将阳性的病料进行病毒分离,通过PCR和间接免疫荧光试验对分离的病毒进行验证,超速离心纯化后经透射电镜观察该病毒粒子的形态结构,证实分离株为PRV,命名为HBfox-25。测得病毒的TCID₅₀为10^-5.6/0.1 mL,经动物回归试验,狐出现神经异常、皮肤瘙痒并撕咬接种部位等症状,5d后死亡。本研究通过PCR技术扩增出HBfox-25的gB基因,并将目的片段与表达载体pET-32a连接,得到重组质粒pET-32a-gB。再将得到的质粒转化至大肠杆菌BL21,37℃震荡培养,待菌液生长至对数期时用IPTG诱导蛋白表达。最后经紫外分光光度计测得纯化后的蛋白浓度为1 mg/mL。通过棋盘滴定法来确定抗原最佳包被浓度。通过饱和硫酸铵法粗提狐血清中的IgG,过柱纯化。将纯化后的IgG免疫兔获得兔抗狐抗体,通过改良的二步法将纯化后的抗体进行HRP标记。从而建立狐PRV间接ELISA检测方法。经验证,本研究建立的狐PRV间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性。该方法的建立为狐PR的诊断和流行病学调查提供了新的技术支持。