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目的:研究广西地桃花对金黄色葡萄球菌感染小鼠的抗菌作用。体外抗菌实验测定地桃花与抗菌药物的联合使用对金黄色葡萄球菌生长曲线的影响。体内抗菌实验通过建立金黄色葡萄球菌感染小鼠的肺炎模型,给予地桃花以及联合使用地桃花与头孢唑林、左氧氟沙星治疗,观察不同治疗组肺炎小鼠变化,为广西地桃花治疗金黄色葡萄球菌性肺炎提供实验依据。方法:体外抗菌实验采用微量稀释法测定地桃花水提物与阿奇霉素、头孢唑林、左氧氟沙星的联合使用对金黄色葡萄球菌生长曲线的影响。体内抗菌实验采用滴鼻法建立小鼠金黄色葡萄球菌肺炎模型。KM小鼠随机分成9组,空白组(NS 0.02 mL·g-1),模型组(NS 0.02 mL·g-1),地桃花高、中、低3个剂量组(40 g·kg-1、20 g·kg-1、10g·kg-1),头孢唑林组[0.5g·(kg×d)-1],地桃花+头孢唑林组[地桃花水提物20 g·kg-1,头孢唑林钠0.5g·(kg×d)-1],左氧氟沙星组[0.09g·(kg×d)-1],地桃花+左氧氟沙星组[地桃花水提物20 g·kg-1,左氧氟沙星0.09 g·(kg×d)-1],每组32只。在小鼠细菌感染前3天给予免疫抑制剂,模型组和各治疗组小鼠上午皮下注射氢化可的松25 mg·kg-1,下午腹腔内注射环磷酰胺25 mg·kg-1,连续3天。免疫抑制24h后,滴鼻法造模2天,每天一次,各实验组小鼠用加样器吸入1 × 109 CFU·mL-1的金黄色葡萄球菌悬液100 μL,并在乙醚麻醉后缓慢滴入鼻腔,接种后使小鼠保持直立体位20 s,以保证菌液因重力作用而进入肺组织,空白组以同等量的生理盐水滴鼻接种。在接种菌液24h后,各组小鼠给予相应的药物每日2次,分别连续4天、9天、13天。分别于造模第5天每组取材12只,第10天、14天每组取材10只。检测小鼠肺组织菌落数,血常规白细胞计数(WBC)、中性粒细胞百分数(NEU%)、中性粒细胞绝对值(NEU),免疫球蛋白IgG和IgM,HE染色观察肺组织病理学变化,ELISA试剂盒测定白介素-6(IL-6)和白介素-10(IL-10)的变化情况,观察不同治疗组对金黄色葡萄球菌肺炎小鼠的抗菌作用。结果:1.地桃花对金黄色葡萄球菌生长曲线的影响:当地桃花水提物浓度达到0.5 g·mL-1时,细菌生长基本被抑制。1/4 MIC的地桃花水提物分别与1/8 MIC的阿奇霉素、1/4 MIC的左氧氟沙星、1/2 MIC的头孢唑林钠联合应用对金黄色葡萄球菌的生长抑制效果比两者分别单独使用效果明显。2.地桃花对金黄色葡萄球菌肺炎小鼠的抗菌作用:(1)感染金黄色葡萄球菌后,模型组小鼠精神萎靡,机体活动性差,肺匀浆菌落数、血液WBC、NEU%、NEU和血清IgG、IgM与空白组小鼠比较均显著增加(P<0.05),肺部病理切片观察结果显示:实验结束小鼠肺组织结构明显异常,肺间质血管周围水肿、出血和坏死,肺泡腔有炎性细胞浸润,肺组织存在明显的细菌菌落。说明模型组炎症病变明显,成功建立了小鼠肺部金黄色葡萄球菌感染模型。(2)地桃花治疗肺炎小鼠后,肺匀浆菌落数、血液WBC、NEU%、NEU和血清IgG、IgM与模型组小鼠比较均显著回降(P<0.05),肺部病理切片观察结果显示:地桃花可以减少支气管炎性渗出物和肺泡炎性细胞浸润,促进肺泡结构恢复正常。随着给药时间延长,地桃花对感染金黄色葡萄球菌肺炎小鼠的抗菌作用显著提高。(3)与头孢唑林组比较,地桃花+头孢唑林组肺匀浆菌落数、地桃花+头孢唑林组小鼠的血液WBC、WBC、NEU%、NEU和血清IgG、IgM均显著减小(P<0.05),表现出地桃花与头孢唑林联合使用对治疗金黄色葡萄球菌肺炎小鼠抗菌作用有明显的提高作用。与左氧氟沙星组比较,地桃花+左氧氟沙星组小鼠的肺匀浆菌落数均显著减小,表现出地桃花与左氧氟沙星的联合使用对治疗金黄色葡萄球菌肺炎小鼠抗菌作用的有一定的相加作用。3.地桃花对金黄色葡萄球菌肺炎小鼠肺组织IL-6、IL-10的影响:(1)感染金黄色葡萄球菌后,模型组小鼠的肺组织匀浆IL-6、IL-10与空白组比较显著增加(P<0.05)。说明模型组肺部有明显的炎症反应。(2)地桃花治疗肺炎小鼠后,肺组织匀浆的IL-6、IL-10与模型组比较均显著回降(P<0.05)。随着给药时间延长,肺组织匀浆的IL-6、IL-10显著下降。(3)与头孢唑林组比较,地桃花+头孢唑林组小鼠的肺组织匀浆的IL-6、IL-10均显著减小(P<0.05),表现出地桃花与头孢唑林联合使用对治疗金黄色葡萄球菌肺炎小鼠抗炎作用显著提高。结论:1.地桃花对金黄色葡萄球菌具有一定的体外抗菌作用。与阿奇霉素、头孢唑林、左氧氟沙星联合使用对金黄色葡萄球菌的生长抑制作用明显提高,呈现不同程度的体外联合抗菌活性。2.地桃花对金黄色葡萄球菌感染的肺炎小鼠有明显治疗作用,可以帮助小鼠抑制细菌炎症,提高机体的抗菌作用。地桃花与头孢唑林、左氧氟沙星的联合使用对治疗金黄色葡萄球菌肺炎小鼠抗菌作用明显提高。3.地桃花以及对地桃花与头孢唑林联合治疗后,肺部细菌清除及炎症细胞减少,肺组织结构逐渐恢复,炎性细胞因子IL-6、IL-10水平降低,因此炎性细胞因子IL-6、IL-10水平在地桃花以及对地桃花与头孢唑林对金黄色葡萄球菌肺炎小鼠的抗菌作用有重要作用的检测价值。4.虽然本课题目前只取得初步的体外和体内抗菌作用研究结果,但为后续的抗菌作用机制以及分子药理学研究工作提供新的思路和方法,为全面、系统地探讨广西地桃花的抗菌作用提供理论基础。