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炎琥宁为穿心莲提取物,具有较强的抗病毒作用和市场前景,目前剂型为注射用炎琥宁。本实验拟建立可用于检测注射用炎琥宁的质量体系。根据所查阅文献,选用紫外分光光度法进行注射用炎琥宁定量检测,测得平均含量在99.5%-100%,RSD平均为0.19%,方法简便快速并具可靠性。但紫外分光光度法为痕量检测灵敏度高,对于纯度要求很高的原料药等并不适用。在非常规条件下产生穿心莲内酯在炎琥宁测定波长处有吸收,容易对炎琥宁检测产生干扰,因此本实验研究使用HPLC法进行炎琥宁的含量检测。由于未见HPLC法测定炎琥宁相关研究报道,因此本实验选用HPLC法测定炎琥宁类似物质效果较好的五个流动相条件,分别用于炎琥宁系统适应性检测,并改变流动相比例和pH值,结果在甲醇-0.05%磷酸二氢钾溶液(pH值为2.5±0.05)(7:3)条件下测定效果最好,其理论塔版数为4812,峰型较好拖尾因子为1.02<1.05,与其他峰完全分离(分离度为2.75),重复进样检测RSD=0.18%,n=10。使用以上HPLC条件测定炎琥宁原料药。重复进样6次测得含量平均值为103.16%,RSD为0.16%,方法重现性和样品稳定性较好。在40-300μg·ml-1范围内药物浓度和峰面积呈良好的线性(r=0.9994 n=6),平均回收率为99.84%,RSD=0.32%,方法准确度高,精确可靠。本药物溶液在24小时内稳定峰面积的相对标准差RSD为0.25%。经过破坏性实验证明杂质和降解物对本方法的实验结果并无显著影响。对不同批次炎琥宁进行抽检,测得含量检测范围在99.37%-100.31% RSD=0.38%。符合HPLC法标准中的98%～102%,RSD≤2%的范围,方法准确可靠,可作为注射用炎琥宁的检测方法理论基础。按原料药HPLC条件和方法测定注射用炎琥宁,辅料峰在主成分峰的检测范围以外出现,因此对检测结果无影响。本HPLC条件最低检测限约为0.0056μg·ml-1,药物含量检测和杂质定量检测灵敏度高,注射用炎琥宁在40-300μg·ml-1内,其峰面积和浓度线性回归关系良好(r=0.9995 n=6);平均回收率为99.73%,RSD=0.40% n=6。本药物溶液在24小时内稳定,峰面积的相对标准差RSD为0.25%,稳定性好。将高温试验,氧化试验,强酸试验,强碱试验结果与未破坏实验对照,发现虽然注射用炎琥宁在各条件下不稳定,但是分离度均大于1.5,降解产物峰与测定峰完全分离,因此使用本方法和条件检测注射用炎琥宁的专属性好。测得注射用炎琥宁含量范围在99.5%-104.6% RSD=0.39%。经实验证明,所筛选出的HPLC炎琥宁原料药检测方法适用于注射用炎琥宁检测。