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本研究利用基因重组技术构建了完整人TRAIL真核表达载体pPICZα/TRAIL,电转化毕赤酵母X-33后,筛选出稳定分泌表达的rhTRAIL工程菌株。经SDS-PAGE,Western blot,亲和层析和离子交换层析纯化证明rhTRAIL与天然hTRAIL具有相同的理化性质。利用80 L发酵罐优化发酵条件,采用甲醇诱导批式发酵,大量制备和纯化rhTRAIL用于生物活性的研究。细胞实验以人乳腺癌SKBr-3和黑色素瘤A-375细胞株为模型。经MTT比色实验、细胞凋亡检测(TUNEL法)和流式细胞术(FACS)检测细胞凋亡率,发现了rhTRAIL能迅速诱导肿瘤细胞发生凋亡。设计并建立了BALB/c小鼠乳腺癌模型,设低、中、高剂量组和对照组,每天给药一次,共给药15天。发现了BALB/c小鼠经腹腔注射rhTRAIL蛋白后,能引起肿瘤细胞的凋亡和坏死,有效抑制乳腺癌细胞D2F2在小鼠体内的生长。本研究为细胞凋亡及人类乳腺癌治疗的研究提供了理论和实验依据。通过研究取得了以下实验结果:①构建完整人TRAIL真核表达载体pPICZα/TRAIL并转化毕赤酵母,筛选稳定分泌表达rhTRAIL工程菌株;②在80 L发酵罐规模下建立了rhTRAIL大量制备和纯化工艺;③在细胞水平上研究rhTRAIL能迅速诱导肿瘤细胞发生凋亡;④在整体水平上研究rhTRAIL对小鼠乳腺癌的抑制作用。其创新性成果是:证实了完整人TRAIL在整体水平上诱导小鼠乳腺癌细胞凋亡并有大量的乳腺癌细胞坏死。