H5和H7亚型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）感染禽类后导致较高的病死率,严重危害家禽养殖业。自然环境中多种家禽和野鸟均易感染,部分毒株还可感染人类,对养殖禽类进行疫苗免疫可有效防控此病,因此,免疫后的抗体水平监测对免疫状态的评估尤为重要。胶体金试纸条作为操作简便、灵敏特异的产品广泛应用于鸡场的抗体水平检测。鉴于市场中缺少针对鸡、鸭等易感禽类AIV抗体检测的通用型胶体金试纸条,本研究应用一株小鼠抗多种家禽IgYFc片段单克隆抗体作胶体金标记物,该单抗能与鸡、鸭等多种禽类血清反应,分别针对H5和H7亚型AIV研制出适用于鸡和鸭血清抗体检测的胶体金试纸条,既能对未免疫禽群感染H5和H7亚型AIV进行快速诊断,也能监测免疫禽群的抗体水平。主要研究结果如下:1.两种重组蛋白的表达与鉴定将重组表达质粒pGEX-KG-HA1₅和p GEX-KG-HA1₇分别在大肠杆菌中进行表达,并纯化两种表达产物,得到大小为63KDa的HA1₅重组蛋白和61KDa的HA1₇重组蛋白。Western Blot检测结果表明这两种蛋白的反应原性和特异性良好。2.鼠抗禽IgYFc片段单克隆抗体的纯化利用辛酸-硫酸铵法纯化小鼠腹水,该腹水由小鼠抗多种家禽IgYFc片段单克隆抗体生产的杂交瘤细胞株10A1注射小鼠所产生,纯化后获得了高纯度的单克隆抗体。3.H5亚型AIV抗体检测胶体金方法的建立鼠抗禽IgYFc片段金标单抗作指示物质,羊抗鼠Ig G（0.1mg/m L）划为C线,AIV-HA1₅蛋白（0.5mg/m L）划为T线,单抗标记量8μg Mc Ab/m L胶体金,标金p H为每毫升胶体金加入9μL 0.1mol/L K₂CO₃溶液,吸水垫CH37K,金标垫Fusion4,血清样品垫XQ-Y7,C线和T线的蛋白稀释液选用包被液3（以p H7.2的PB为基础缓冲液）,金标喷量5μL/cm。该试纸条特异性和重复性好,4°C条件下可保存六个月;检测免疫的鸡血清和鸭血清共152份,与HI方法相符的有140份,符合率为92.11%（140/152）,检测未免疫的鸡血清和鸭血清共14份,试纸条检测结果均为阴性,表明本试纸条可用于鸡和鸭血清抗体效价的测定。4.H7亚型AIV抗体检测胶体金方法的建立鼠抗禽IgYFc片段金标单抗作指示物质,羊抗鼠Ig G（0.1mg/m L）划为C线,AIV-HA1₇蛋白（0.3mg/m L）划为T线,单抗标记量8μg Mc Ab/m L胶体金,标金p H为每毫升胶体金加入9μL 0.1mol/L K₂CO₃溶液,吸水垫CH37K,金标垫Fusion4,样品垫NJ-Y8,C线和T线的蛋白的稀释液选用包被液2（以p H8.2的TBS为基础缓冲液）,金标喷量6μL/cm。该试纸条特异性和重复性良好,4°C条件下可保存三个月;检测免疫的鸡血清和鸭血清共167份,与HI方法相符的有158份,符合率为94.61%（158/167）,检测未免疫的鸡血清和鸭血清共14份,试纸条检测结果均为阴性,表明本试纸条可用于鸡和鸭血清抗体效价的测定。