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猪嵴病毒(PKV)是小核糖核酸病毒科嵴病毒家族的成员,是近几年新发现的能引起猪腹泻的重要病原之一,主要危害三周龄以下的仔猪。PKV自2007年被首次发现以来,已在世界各地的多个国家报道有PKV的存在,且在健康猪群和腹泻猪群血清或粪便样品中有很高的阳性率。但表现腹泻症状的猪中的阳性率要比健康猪高得多,并且通常与其他腹泻病毒具有很高的共感染率,影响着养猪业的健康发展。为调查河北省PKV的流行情况,本研究从河北省各地区的48个大规模养猪场收集了 280份粪便样本,并通过RT-PCR进行病原检测。结果显示,在所收集的样本中,有89(31.8%)份样本的PKV检测呈阳性,所检测的河北省11个地市均存在不同程度的感染。与其他地区相比,保定地区的阳性率更高,阳性率为40%(18/45)。PKV和PRRSV的合并感染率(46.1%)高于和其他腹泻病毒PEDV(38.2%),PDCoV(3.4%)和PBOV(1.1%)。表明PKV在河北省流行较广,感染率较高。本研究扩增得到12个PKV VP1基因序列,使用DNA-Star软件中的MegAlign与在GenBank上登录的参考基因序列进行比较。核苷酸同源性为78%～100%,在231和239氨基酸位置检测到了氨基酸缺失,在238位点存在氨基酸插入。使用生物学软件MEGA7.0进行系统进化分析,进化树显示河北省的大多数毒株(10/12)处于同一分支,每个分组均含有从腹泻症状的猪中分离的序列,表明不存在独特的PKV序列与腹泻有联系。使用生物学软件RDP4和Simplot检测到了 VP1基因存在的重组位点。本研究将为PKV的流行和演变提供理论参考,为河北省PKV的防治提供科学依据。ELISA由于具有操作简便、特异性强、灵敏度高,便于进行大批量血清检测等优点,临床上常被用作快速血清诊断方法之一。本研究通过原核表达系统表达PKVVP0蛋白作为包被抗原,并通过Western blot鉴定证明重组蛋白与PKV阳性血清能发生良好的特异性反应,优化反应条件,得出PKV VP0间接ELISA检测方法最适反应条件是抗原包被浓度为0.62 μg/mL,血清稀释浓度为1:200,最佳酶标二抗稀释浓度1:5 000,使用5%脱脂奶粉作为封闭液37℃孵育1 h,显色10 min,当检测样品OD450nm<0.225就可以判定血清样品抗体为阴性,OD450nm≧0.225就可以判定血清样品抗体为阳性,且特异性强、重复性好。建立的PKV VP0蛋白间接ELISA方法,作为一种操作简单,灵敏度高,结果准确的血清学检测方法,为PKV的监测和预防提供了技术支持。实时荧光定量PCR方法已被广泛地应用于临床检测病原体,具有操作简单,灵敏度高,检测数量多等优点。本研究为了建立能检测猪嵴病毒的实时荧光定量PCR方法,设计一对荧光检测引物,优化反应体系和反应条件,建立的荧光定量PCR方法扩增曲线呈现良好的线性关系,所建立的荧光定量PCR方法比常规PCR灵敏100倍,灵敏度高,通过检测收集的河北省猪粪便样品,与常规PCR相比,有更高的灵敏性。该实时荧光定量PCR方法为猪嵴病毒的病原学检测,对河北省猪嵴病毒的监测提供了有力的技术支持。