四川地区鸭源沙门氏菌分离与血清型分析及其药敏性与耐药基因相关性研究

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本研究围绕四川眉山、四川绵阳、四川德阳、四川彭州、四川邛崃、四川新津和四川都江堰共七个地区规模化鸭场疑似沙门氏菌病的患鸭开展了:①鸭源沙门氏菌的分离与生化鉴定、血清型分型和致病性试验:②基于鸭源沙门氏菌invA基因的PCR检测方法的建立与应用;③鸭源沙门氏菌药物敏感性试验及耐药谱系分析;④鸭源沙门氏菌耐药基因检测与耐药表型分析,获得结果如下:1.鸭源沙门氏菌的分离与生化鉴定、血清型分型和致病性试验:利用传统分离、生化鉴定方法,共分离鉴定出48株鸭源沙门氏菌,其中绵阳9株、邛崃8株、德阳6株、都江堰5株、眉山3株和新津3株。血清型鉴定试验表明:共有6种血清型,分别是鼠伤寒沙门氏菌(37.5%)、伤寒沙门氏菌(18.7%)、肠炎型沙门氏菌(14.6%)、鸭沙门氏菌(18.7%)、都柏林沙门氏菌(6.3%)和沙门氏菌Ⅱ(8,3%),不同地区血清型有差异。致病性试验表明,分离的48株鸭源沙门氏菌对7日龄健康雏鸭均具有较高的致病性。2.基于鸭源沙门氏菌invA基因PCR检测方法的建立与应用:根据沙门氏菌invA基因设计一对特异性引物(P1/P2),对沙门氏菌基因组DNA进行PCR扩增,结果显示:能扩增出预期(608bp)大小一致的目的片段,鸭源阴性对照菌株(ATCC25922大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌)均不能扩增出任何条带;扩增灵敏度为5.1×102CFU/mL:采用建立的PCR方法对含有鸭源沙门氏菌的48份阳性样品和2份健康样品进行检测,结果显示,48份(100%)样品均能扩增出与预期大小一致(608bp)的特异性片段,扩增产物测序结果BLAST显示,与目的序列相似性达97%以上,2份未感染沙门氏菌的鸭病料不能扩增任何条带。综上可知沙门氏菌invA基因PCR方法灵敏、可靠,可以用于临床鸭源沙门氏菌的监测。3.鸭源沙门氏菌药物敏感性试验及耐药谱系分析:48株鸭源沙门氏菌药物敏感性试验表明,分离菌对36种临床常用抗生素均产生耐药性,其中抗生素耐药率大于50%的有14种(38.9%),分别是青霉素(P-G)100%、苯唑西林(OXA)100%、利福平(RIF)100%、氨苄西林(AMP)93.8%、四环素(TET)83.3%、红霉素(ERY)79.2%、复方新诺明(SXT)72.9%、亚胺培南(IMP)66.7%、奥格门叮(AOA)66.7%、多西环素(DC)62.5%、萘啶酸(NAL)62.5%、痢特灵(FUR)58.3%、氯霉素(CMP)54.2%和甲氧苄胺嘧啶(TMP)50.0%;抗生素耐药率小于10%的仅有2种(5.6%)分别是头孢哌酮(CFP)6.3%和丁胺卡那(AKN)8.3%;其余20种(55.6%)抗生素耐药率介于10%-50%之间。七个地区鸭源沙门氏菌对不同抗生素的耐药性有大差异,彭州对除头孢曲松(CRO)和头孢吡肟(CPI)外的34种(94.4%)抗生素全部有耐药性;绵阳、德阳、邛崃和都江堰则是对除头孢哌酮(CFP)、哌拉西林(PIP)、丁胺卡那(AKN)、妥布霉素(TOB)和诺氟沙星(NOR)外的31种(86.1%)抗生素全部有耐药性;新津则对16种(44.4%)抗生素产生耐药性。48株鸭源沙门氏菌全部呈现多重耐药,41株(85.6%)同时耐10种抗生素以上,29株(60.3%)同时耐15种抗生素以上,16株(33.3%)同时耐20种抗生素以上2株(2.1%)同时对30种以上抗生素耐药;多重耐药主要是15-16耐(18.9%)、8-10耐(10.4%)和11耐(10.4%);七个地区中,眉山主要以3-16耐,绵阳主要为8-26耐,德阳主要为3-26耐,邛崃主要为8-23,新津主要为8-14耐,彭州主要为12-30耐,都江堰主要为11-21耐。各个地区抗生素耐药性以及多重耐药性存在较大差异。4·鸭源沙门氏菌耐药基因检测与耐药表型分析:设计8对耐药基因,共检测出了6种耐药基因,检出率分别是aph(3’)-Ⅱa(85.7%).aadAl(75.0%).aadA2(60.7%). tet(A)(85.0%).dphs(77.1%)和parC(70.0%),而另2种耐药基因bla-TEM和tet(G)尚未检出,耐药基因检出和耐药表型相符:耐药基因PCR产物测序表明,6个耐药基因PCR扩增产物与对应的基因序列相似性均大于97%。七个地区的耐药基因分布存在一定的差异,且1株鸭源沙门氏菌同时携带多种耐药基因的现象普遍存在。
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