试验以幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）为材料，采用不同培养基进行培养和保存，并制备成完全抗原对妊娠后期的奶牛进行免疫，用间接ELISA法探讨其免疫应答的规律。本试验对Hp的培养、保存、免疫应答规律和初乳的抑菌活性做了初步探讨，为制备高含量的抗Hp的免疫乳制品及相关生物制剂提供技术依据，也为牛初乳及免疫乳的开发应用和深入研究积累经验并提供借鉴。 1．Hp的培养与保存 本试验采用不同培养基对Hp进行培养并进行保存，结果表明：固体培养Hp，培养基为哥伦比亚琼脂基础加联合抗生素(10mg·L^-1盐酸万古霉素+10mg·L^-1两性霉素B+2500u·L^-1多粘菌素B+5mg·L^-1甲氧苄胺嘧啶)，并分别添加6％脱纤维绵羊血、6％马血清，在5％O₂，10％H₂，85％N₂的微需氧条件下，37℃培养3d，均可培养出Hp；严格无菌的条件下，不添加联合抗生素，对细菌生长没有影响，且不会造成杂菌污染。液体培养Hp，布氏肉汤基础中加入联合抗生素和6％马血清，Hp增菌迅速，但如不及时更换新鲜的微需氧环境，极易形成球形体。菌株采取冷冻保存液法保存于-60℃低温条件下，可以成功复苏。 2．免疫奶牛及其应答性研究 本试验以Hp全菌抗原对即将分娩的奶牛进行免疫，收集血液和分娩后7天内的初乳，应用间接ELISA法测定血清和初乳中的抗体效价，研究奶牛的免疫应答规律并进行抑菌试验，结果表明：采取分娩前6、4、2、1周免疫的方案，菌量为4×10⁹CFU／头次，可以有效的引起免疫应答。间接ELISA法检测乳清和血清中抗Hp抗体效价的最适反应条件为：细菌包被浓度为5×10⁸CFU·mL^-1，血清按1：640稀释，乳清按1：1280稀释，酶标兔抗牛IgG抗体的工作浓度为1：20000，37℃孵育1h；底物37℃孵育20min，测得血清中的抗体效价逐渐上升并在分娩前后达到最大值，P／N值最高可达4.56，然后随着泌乳的进行缓缓下降。初乳中的抗体效价在分娩的当天出现最大值，P／N值最高可达5.465，然后也随着泌乳的进行迅速下降。成年牛比青年牛表现出了更好的免疫应答效果。免疫初乳和对照初乳均有明显的抑菌活性，56℃30min灭活后，其抑菌活性消失。未免疫常乳无论灭活与否，均无抑菌活性。