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鸡传染性法氏囊病是由鸡传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的鸡和火鸡的一种急性高度接触性传染病。目前,该病主要通过疫苗接种来防控。除给雏鸡使用活疫苗免疫外,通常还给种鸡注射灭活疫苗使雏鸡获得高的母源抗体,以保护其在生命早期不感染传染性法氏囊病病毒。国内鸡传染性法氏囊病灭活疫苗的生产通常采用鸡胚成纤维细胞培养病毒液后制备而成。因鸡传染性法氏囊病毒在鸡胚成纤维细胞上增殖滴度不高,需要加大浓缩倍数,增加生产成本,免疫效果差,所以在实践中应用效果差。目前,国内各大种鸡场大多采用进口灭活疫苗。为了研究鸡传染性法氏囊病毒高效培养方法,本研究采用鸡胚源DF-1细胞系代替传统的鸡胚成纤维细胞,用激流式生物反应器纸片载体代替传通的玻璃转瓶培养鸡传染性法氏囊病毒,为生产上提供一种优质、高效的法氏囊灭活疫苗,以满足市场的需要。研究结果如下:1.通过对DF-1细胞传代、复苏及冻存方法、培养条件等特性进行研究,确定了DF-1细胞的最佳培养条件。DF-1细胞可在37℃条件下培养,培养基为DMEM/F12,生长期的培养基中加入10%的胎牛血清最好,细胞复苏时应采用换液而不能采取离心的方法。2.通过在方瓶中对鸡传染性法氏囊病毒HQ株在DF-1细胞上的适应及增殖条件进行优化,结果表明,鸡传染性法氏囊病毒HQ毒在DF-1细胞上具有很好的适应性,而在Vero细胞上适应性差。鸡传染性法氏囊病毒在DF-1细胞上增殖的最佳pH为7.0,最佳维持液血清含量为2%,最佳接毒时间为细胞传代后72h,最佳接毒量的MOI为0.8 (TCID50/细胞),最佳收毒时间为接种后36h。这为IBDV在生物反应器大规模培养技术的研究提供了参考依据。3.对应用AP10和AP20激流式生物反应器和纸片载体增殖IBDV的条件进行优化,试验结果表明,反应器中IBDV增殖的最适pH为7.0-7.2,37℃最适合细胞与病毒的增殖,AP10激流式生物反应器最佳的细胞接种数量为3×109个,MOI为0.9(TCID50/细胞),当细胞的糖耗下降至接近零时为最佳收病毒时间, IBDV在反应器中的毒价可达到109.5TCID50·mL-1。本研究在国内首次采用DF-1细胞系代替鸡胚或其原代成纤维细胞培养IBDV,并首次采用激流式生物反应器和纸片载体代替转瓶大量增殖DF-1细胞进行IBDV的大规模培养,使IBDV的毒价由在转瓶成纤维细胞上培养时的107.5TCID50·mL-1上升至目前的109.5TCID50·mL-1,提高了100倍。本研究为IBDV灭活疫苗和其他生物制品的大规模生产开辟了一条新途径,不仅大大提高了疫苗的质量,降低了生产成本,而且更符合现代生物制品行业发展的生物安全需要,因而具有重大的理论意义和实用价值,具有更有广阔的应用前景。