乙脑病毒全长cDNA的扩增、克隆及体外转录制备感染性转录体的研究

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乙脑病毒,属黄病毒科黄病毒属成员。基因结构为单股正链RNA,全长11kb。本病毒主要侵犯中枢神经系统,且患者以儿童居多,在黄病毒中乙脑病毒引起的乙型脑炎病死率最高,年病死人数超过1万人。随着对该病毒病原学研究的深入,从基因水平探讨病毒的生物学特性,是研究其致病机理与构建新型疫苗的必由之路。 但是乙脑病毒为RNA病毒,和其它非逆转录RNA病毒一样,在复制过程中不形成DNA中间体。要利用分子生物学技术通过对病毒RNA直接进行重组、突变等方法在基因水平研究病毒的分子生物学特性存在着一定的困难,因为突变、重组、克隆等分子生物学技术都是在DNA水平上的操作。体外转录制备感染性RNA(感染性转录体)技术为RNA病毒的分子生物学研究开辟了新路。该技术是将病毒的RNA逆转录成cDNA,把全长的cDNA置于RNA聚合酶启动子的下游,在RNA聚合酶的作用下在体外转录出全长的正链RNA,经转染易感细胞后即可复制出子代病毒颗粒。由于这种子代病毒是来自cDNA,这样人们就可以在DNA水平上进行操作。重组或突变将被转录到子代病毒的RNA中,从而实现人为改造病毒达到研究其复制、表达
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