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第一部分ZFAS1在结直肠癌组织中的表达及其临床意义目的:检测ZFAS1在结直肠癌组织中的表达水平,并分析其与临床病理参数及预后的关系。方法:应用q RT-PCR方法检测159对结直肠癌组织及癌旁组织的ZFAS1表达量,比较两者ZFAS1表达量的差异,同时检测了12例结直肠癌肝转移患者原发肿瘤及转移灶组织ZFAS1的表达。卡方检验分析ZFAS1表达水平与临床病理参数的相关性;采用Kaplan-Meier方法绘制生存曲线,Log-Rank方法比较ZFAS1高表达组和低表达组之间的生存率;采用Cox比例风险模型进行多因素分析,以确定校正多因素作用后ZFAS1对预后的影响。结果:159例结直肠癌组织及其配对正常组织ZFAS1的表达检测结果显示,ZFAS1在结直肠癌中表达显著上调(P<0.0001),其中有76例患者的ZFAS1表达在结直肠癌组织中较正常上调2倍以上;且肝转移组织中ZFAS1的表达量明显高于原发部位(P<0.05)。结直肠癌组织中ZFAS1的表达与淋巴结转移(P=0.045)及TNM分期(P=0.003)呈正相关。与低表达ZFAS1的患者相比,ZFAS1高表达的患者表现出更差的预后,其无瘤生存时间(P=0.012)及总生存时间均更短(P=0.003)。多因素分析显示,ZFAS1是结直肠癌患者无瘤生存时间(HR=2.132,95%CI=1.015-4.546,P=0.048)与总生存时间(HR=1.878,95%CI=1.006-3.529,P=0.0492)的独立预后因素。结论:ZFAS1在结直肠癌组织中高表达,并与淋巴结转移及高的TNM分期相关。ZFAS1是结直肠癌患者肿瘤复发和死亡的独立预后因素。第二部分ZFAS1对结直肠癌细胞迁移与侵袭的影响目的:研究ZFAS1对结直肠癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法:检测结直肠癌细胞株中ZFAS1的表达,选择两株表达量较高的细胞系,应用si RNA技术干扰ZFAS1的表达;采用CCK-8方法研究ZFAS1基因沉默后结直肠癌细胞增殖能力的变化;应用细胞划痕实验与Transwell侵袭小室方法研究ZFAS1基因沉默对结直肠癌细胞迁移和侵袭能力的影响;采用分子克隆技术构建ZFAS1sh RNA慢病毒表达载体,包装病毒后感染结直肠癌细胞,构建ZFAS1稳定敲降细胞株;采用裸鼠尾静脉注射肺转移实验,研究ZFAS1基因沉默对结直肠癌细胞体内转移能力的影响。结果:ZFAS1基因沉默对结直肠癌细胞增殖没有明显影响;沉默ZFAS1能够抑制结肠癌细胞的体外迁移与侵袭能力及裸鼠肺转移。结论:ZFAS1能够抑制结直肠癌细胞的迁移、侵袭和转移。第三部分ZFAS1影响结直肠癌转移机制的初步研究目的:初步研究ZFAS1影响结直肠癌细胞转移的作用机制。方法:应用q RT-PCR法及Western blot法检测在ZFAS1稳定敲降的结直肠癌细胞中EMT相关基因的表达;应用si RNA技术干扰ZEB1的表达,验证ZEB1与E-钙粘素(E-cad)及波形蛋白(VIM)的关系;双荧光素酶实验验证ZEB1是否是mi R-150-5p的靶基因;应用细胞划痕实验与Transwell侵袭小室方法研究mi R-150-5p与ZEB1对结直肠癌细胞迁移和侵袭能力的影响;通过荧光素酶实验、细胞划痕实验及Transwell侵袭小室方法研究ZFAS1与mi R-150-5p的关系。结果:ZFAS1敲降后,结直肠癌细胞中上皮细胞标志E-cad表达显著上升,而间质细胞标志VIM和ZEB1表达显著下降;ZEB1能够调节E-cad及VIM的表达;mi R-150-5p通过靶向作用于ZEB1抑制结直肠癌细胞的迁移与侵袭;ZFAS1与mi R-150-5p结合,封闭了mi R-150-5p的抑癌作用。结论:ZFAS1与mi R-150-5p结合,封闭了mi R-150-5p对其靶基因ZEB1的抑制作用,引起ZEB1表达上调,加速EMT的进程,从而促进肿瘤的转移。