表面修饰有阳离子的磁性二氧化硅微粒的制备及其应用

来源 :西北大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hnwkn2008
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磁性复合微粒是超顺磁性纳米粒子与有机或无机材料通过包覆、交联等方式形成的纳微米级复合粒子。磁性复合微粒具有超顺磁性、较高的比表面积、可修饰功能基团等特点。因此,广泛应用于免疫学检测、核酸纯化、细胞分选、药物载体和酶的固定化等生物医学领域。本研究制备了两种表面修饰有阳离子的磁性二氧化硅微粒,基于两种磁性微粒建立了200μL人全血基因组DNA纯化方法,并对其进行优化。采用微乳液法,以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)作为表面活性剂、甲苯为溶剂,与铁盐溶液(FeCl2和FeC13的混合溶液)剧烈搅拌形成微乳液,以氨水提供碱性环境合成Fe304磁性微粒,在原位以正硅酸乙酯(TEOS)提供硅源,直接在微乳液中包覆Fe304磁性微粒制备得到二氧化硅磁性微粒。再经修饰分别得到表面含有二乙氨基乙基(DEAE)和L-组氨酸(L-His)的两种磁性阴离子交换二氧化硅微粒。基于表面修饰有二乙氨基乙基(DEAE)和L-组氨酸(L-His)的两种磁性阴离子交换二氧化硅微粒,以人全血作为样本,分别建立适用于200μL人全血基因组DNA纯化方法。并通过对纯化过程中裂解条件、结合条件、磁性微粒用量及清洗、洗脱条件等步骤对该方法进行优化,实验结果如下:(1)对于200μL全血体系,DEAE-磁粒纯化可得到基因组DNA 3~5μg,其A260/A280值均介于1.70~1.90之间,纯化所得DNA分子结构完整,可用于PCR等分子生物学下游应用。但该方法需高盐洗脱,洗脱得到的DNA需经醇沉脱盐处理。(2)基于His-磁粒200μL人全血基因组DNA纯化方法可纯化得到基因组DNA 3~4μg,其A260/A280值均介于1.65~1.8之间,相比前者纯化得到DNA的量较少,该方法结合所需pH5.0,可通过改变溶液的pH值洗脱,所需pH为8.5,洗脱得到的基因组DNA可直接用于下游分子生物学实验。
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