AMPA受体酪氨酸磷酸化修饰在机体低氧反应中作用的研究

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目的:(1) 观察向家兔脑干孤束核(NTS)或疑核(NA)内微量注射酪氨酸蛋白激酶(PTK)阻断剂和谷氨酸AMPA受体阻断剂对常氧呼吸和低氧呼吸反应的影响,探讨PTK和AMPA受体在低氧呼吸反应中的作用。(2) 观察低氧通气后NTS和NA磷酸化酪氨酸免疫阳性神经元的数量变化;观察磷酸化酪氨酸和AMPA受体亚单位GluR1在突触后膜共存的情况,推测在低氧呼吸反应中AMPA受体和PTK信号转导途径的关系。 方法:1.电生理学实验:实验在麻醉、肌松、人工通气的成年家兔上进行。常氧通气为医用空气(20%O2-80%N2),低氧通气为10%O2-90%N2混合气体。以膈神经放电为呼吸观察指标。通过解剖定位和引导呼吸神经元放电定位NTS和NA,分别向NTS或NA内微量注射PTK阻断剂genistein、genistein非活性拟似物daidzein、AMPA受体阻断剂CNQX,观察注射前后常氧和低氧通气对膈神经放电以及动脉血pH值的变化。2.荧光免疫组化实验:将动物分为常氧通气组和低氧通气组。在低氧通气不同时间后处死动物,取脑做新鲜冰冻切片。免疫组化处理包括:(1)用特异性抗体单独标记NTS和NA处的磷酸化酪氨酸,比较各组的免疫阳性细胞数目;(2)用两种特异性抗体同时标记磷酸化酪氨酸和AMPA受体GluR1,观察磷酸化酪氨酸和AMPA受体共存情况。 结果:1.电生理学实验:(1) 低氧通气开始后动物膈神经放电幅度和呼吸
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