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血清4型禽腺病毒(Fowl Adenovirus serotype 4,FAdV-4)属于腺病毒科,禽腺病毒属,禽腺病毒C种。血清4型禽腺病毒强毒株对雏鸡的致病能力较强,可致鸡发生心包积水-肝炎综合征(Hydropericardium hpatits syndrome,HHS),死亡率高达30%～90%。病毒可经粪-口途径水平传播,也可垂直传播,在全世界分布广泛。给我国及全世界的养禽业造成了严重的经济损失。本试验利用原核表达系统表达了血清4型禽腺病毒的两个主要结构蛋白,五邻体(penton)和六邻体(hexon),最终得到两个带His标签的融合蛋白。SDS-PAGE结果显示,His-penton的大小为78KD,诱导6h有最大表达量;His-hexon的大小为118KD,诱导3h有最大表达量。Westem-blot结果显示,表达的这两种蛋白均能识别抗FAdV-4阳性血清以及抗His抗体,且条带单一。使用FAcN-4抗原皮下注射免疫6～8周龄BALB/c小鼠,0.5ml/只,间隔两周免疫一次,免疫三次后,取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,以五邻体和六邻体蛋白作为间接ELISA方法筛选抗原,,对克隆和亚克隆杂交瘤细胞株进行筛选,共筛选到5株阳性细胞株,分别命名为2D3、1D3、3C2、3H5和3D6,5株阳性杂交瘤细胞株腹水的 ELISA 效价分别为:1:25600、1:12800、1:25600、1:6400 和 1:6400。其中分泌抗六邻体蛋白特异性抗体的有4株(2D3、1D3、3C2和3H5),分泌抗五邻体蛋白特异性抗体的有1株(3D6)。亚类鉴定结果显示,1D3属于IgM类,2D3和3D6属于IgG1亚类,3C2和3H5属于IgG2a亚类。胶体金免疫层析试纸条结合了胶体金免疫层析技术本身具有的快速简便、准确直观等优点和单克隆抗体技术具有的良好特异性和敏感性,是目前现场应用最广泛的一种诊断方法。本试验选用第二章制备的抗六邻体蛋白的1D3和3C2抗体分别作为检测抗体和标记抗体,制备了检测FAdV-4的胶体金免疫层析试纸条。用均一性好的20 nm的胶体金标记1D3抗体,用纯化的单克隆抗体3C2和羊抗鼠IgG,二抗包被硝酸纤维素膜,分别作为检测线和质控线组装成试纸条。通过对组装试纸条的实验室试验结果分析得出,该试纸条可以特异性识别血清4型禽腺病毒,具有良好的特异性;且不同批次制备的试纸条对同一批样品的检测结果一致,稳定性良好。可用于FAdV-4的实验室快速检测,为FAdV-4病的快速诊断及免疫预防提供了可靠的手段和方法。