研究背景及目的:大肠癌(colorectal cancer,CRC)是一种多见的消化道癌症,包括直肠和结肠癌。对于目前来说,诱发大肠发生癌变的最多见的原因是:年龄的逐渐增长;饮食结构:高脂,少纤维。更加令人担忧的是大肠癌在早期发生病变的时期并没有较为典型且明显的征兆,这一特征使得大肠癌患者的诊断比其他癌症呈延迟性。早期发现和诊断是提高结直肠癌的疗效和预后的关键。蛋白质组学是对蛋白质的大规模研究,特别是蛋白质组的结构和功能。蛋白质是生物体的重要组成部分,因为它们在细胞生理代谢途径中发挥中心、关键的作用。蛋白质组学技术,因其可在短时间内对标本中的大量蛋白进行定量检测及差异鉴定的优势而得到研究学者们的青睐。本研究收集大肠癌组织及相应的健康正常组织,利用上述技术方法进行分析检测,最终捕获表达量具有统计学意义的蛋白25个:KRT18在内的18个相对高表达蛋白;TPM2在内的7个相对低表达蛋白。我们对其中显著差异蛋白前梯度蛋白2(anterior gradient-2,AGR2)采用免疫印记技术加以鉴定,并用免疫组化技术分析临床病理特征,旨在探索病理特征与大肠癌发生、发展、转移的关系。方法:以下3部分论述组成本研究的主要内容:1.二维液相色谱与质谱联用技术检测组织标本(大肠癌及相应正常健康组织),获得标本中相对较高表达的蛋白以及相对较低表达蛋白列表。方法:(1)裂解收集的配对的肿瘤组织,以组织中提取的总蛋白制备成多肽。(2)二维液相色谱质谱联用技术分析鉴定配对组织中的蛋白种类及表达量。(3)对比数据库,统计学分析上述步骤中鉴定的不同蛋白的表达量,获取差异表达蛋白列表。2.考证差异蛋白AGR2在配对的肿瘤组织中的表达含量:选取4组不同TNM分期的大肠癌腺癌配对组织标本,Western Blot观察差异蛋白AGR2在大肠癌腺癌组织中是否有相对较高的表达。3.分析比对大肠癌患者的一般临床资料的差异性与患者的肿瘤组织中相对较高的稳定表达的差异蛋白AGR2的表达之间的潜在的关联:收集不同TNM分期、不同年龄、不同性别的大肠癌患者的组织标本,对标本的切片进行免疫组化法观察目的蛋白AGR2的表达,对患者的性别、年龄等数据联合目的蛋白的表达进行统计学分析和比对。结果:1.最终捕获表达量具有统计学差异的蛋白25个:KRT18在内的18个相对高表达蛋白;TPM2在内的7个相对低表达蛋白。2.Western Blot结果证实大肠癌组织中AGR2的表达量较癌旁组织明显升高,进一步验证了第一部分二维液相色谱与质谱联用技术的结果。3.(1)免疫组织化学染色结果显示,AGR2在大肠癌癌组织中高表达,主要表达在胞质中。(2)AGR2蛋白的表达与大肠癌组织TNM分期、分化程度及远处转移有关(P<0.01),并与患者血清中CEA表达水平密切相关。然而与患者的性别、年龄、临床诊断均无关(p>0.05)。结论:1.大肠癌组织中差异蛋白AGR2的表达较癌旁组织相对异常增高。2.AGR2的表达上调可能与大肠癌的发生、发展、侵袭和转移有关,是人大肠癌发生发展的促进因子。3.是大肠癌潜在的诊断和检测治疗及预后的指标。但其在大肠癌进展中的具体机制,还需要进一步研究。