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目的:应用S-P免疫组织化学法检测caspase-3在正常食管上皮、不典型增生、食管癌、转移淋巴结中的表达。原位末端标记法(TLINEL 法)检测正常食管上皮、不典型增生、食管癌、转移淋巴结中的细胞凋亡,旨在探讨caspase-3在食管癌的形成和发展中的作用。
方法:材料取自沈阳中国医科大学附属第一医院胸外科1995-2004年经胃镜取材及手术切除标本127例(术前均未行放疗和化疗),标本用95%酒精和10%中性福尔马林固定、石蜡包埋,制成4um厚的切片。所有标本均经HE染色和病理确诊。正常食管上皮30例,男23例,女7例。胃镜取材不典型增生18例,全部为男性。浸润癌79例,男66例,女13例,其中有淋巴结转移60例,男55例,女5例,无淋巴结转移19例,男11例,女8例。病理诊断明确高分化25例,中分化34例,低分化20例。根据国际抗癌联盟(UICC)食管癌 TNM 分期标准,Ⅰ期20例,Ⅱa+Ⅱb 期38例,Ⅲ期21例,Ⅳ期0例。切片通过多克隆抗体Caspase-3、链霉素抗生物素-过氧化物酶免疫组化超敏试剂盒、采用 TIJNEL 试剂盒和显色剂进行检测和分析。
结果:caspase-3在正常食管上皮、不典型增生、食管癌、转移淋巴结中的阳性表达率76.5296,58.91%,28.3596,41.47%。正常食管上皮、不典型增生的caspase-3阳性表达率高于食管癌、转移淋巴结(p<0.05),正常食管上皮和不典型增生caspase-3阳性表达率差异无显著性(P>0.05),食管癌和转移淋巴结中的caspase-3 阳性表达率差异存在显著性(p<0.05)。caspase-3的表达与肿瘤的分化有关(P<0.05),细胞分化高的caspase-3阳性表达率显著高于细胞分化差的(p<0.01),与术后病理分期,淋巴结转移有关:与肿瘤大小,部位,年龄,性别无关(p>0.05)。所有的正常食管上皮、不典型增生、食管癌、转移淋巴结中均可检测到凋亡细胞。不典型增生、食管癌、转移淋巴结中的凋亡指数显著高于正常食管上皮(p<0.01)。不典型增生、食管癌、转移淋巴结中的凋亡指数差异无显著性(p>0.05)。食管癌细胞凋亡水平与淋巴结转移,细胞分化程度有密切关系(p<0.05),但与术后病理分期,肿瘤大小,部位,年龄,性别无关(p>0.05)。
结论:凋亡是一个多因素参与的过程,caspase-3 激活是产生凋亡的途径之一,caspase-3 在食管癌变的不同阶段表达存在差异,在食管癌中低表达可能是食管发生癌变的晚期事件,caspase-3 的表达增高且与细胞凋亡的关系很密切,食管癌的发生发展与caspase-3失活或表达下调有关;不典型增生上皮caspase-3的表达与细胞凋亡存在正相关。caspase-3 可望成为食管癌的早期诊断指标,也为不典型增生的诱导凋亡疗法提供部分理论依据,具有较强的理论和临床意义。