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大肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一,近年来其发病率呈上升趋势。目前大肠癌的治疗主要采用手术结合放化疗的方法,疗效并不是很理想,究其原因与肿瘤的复发转移有很大关系。正常情况下机体Th1/Th2类细胞因子处于动态的平衡状态,即免疫平衡状态。恶性肿瘤患者普遍存在Th1细胞下降,Th2细胞趋高的变化,即免疫平衡向Th2型偏移。诱骗受体3(Decoy receptor3,DcR3)是新近发现的肿瘤坏死因子受体家族的新成员,能竞争性地抑制配体与死亡受体的结合,从而阻断配体诱导产生的细胞凋亡,并与多种恶性肿瘤有关,但对于大肠癌患者DcR3基因的表达异常是否会导致机体免疫失衡及DcR3基因在大肠癌进展和发生转移的过程中的作用还未阐明。为此本课题通过探讨DcR3在大肠癌的表达情况及其对机体免疫平衡的影响,评价DcR3在诊断及预后判断中的价值。
目的:探讨DcR3基因在大肠癌组织与其在正常组织的表达差异及其对机体免疫平衡的影响。
方法:1、我们用半定量RT-PCR方法检测了30例大肠癌患者癌组织和正常粘膜组织标本中DcR3的表达情况,采用FOTODYNE凝胶成像分析系统测量两组标本PCR产物的积分光密度值,实验数据经统计学处理,对比观察大肠癌组织与正常粘膜组织之间DcR3基因的表达差异。
2、将大肠癌患者与正常人外周血液稀释后,离心分层,吸取淋巴细胞悬液,分别涂片并用记号笔在涂片上标记细胞斑;采用免疫组化染色的方法测定血CD4T和CD8T阳性细胞的分布情况及CD4T和CD8T阳性细胞的比值,了解大肠癌患者与正常人外周血中T淋巴细胞亚群分布和细胞免疫功能的差异,并与DcR3基因的表达情况作相关分析。
3、为明确大肠癌患者体内免疫平衡变化,我们采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定大肠癌患者与正常人外周血IFN-γ、IL-4浓度和IFN-γ/IL-4比值,并与DcR3基因的表达情况作相关分析。
结果:1、在半定量RT-PCR方法检测的30例大肠癌患者组织标本中,DcR3mRNA的表达率在正常粘膜组织为7%,在大肠癌组织全部表达,表达率为100%,DcR3基因在大肠癌组织中的表达明显高于正常组织。经统计分析可知,大肠癌组织与正常粘膜组织之间DcR3mRNA的表达情况有明显差异。
2、在正常人外周血中CD4T百分比为(30.37±11.29%)要高于大肠癌患者(26.31±8.78%)(P>0.05),无统计学意义;大肠癌患者外周血CD8T阳性细胞的百分比(34.81±11.55%)高于正常人(26.96±7.47%)(P<0.05),正常人外周血CD4T/CD8T(1.20±0.42)要高于大肠癌患者(0.93±0.48)(P<0.05),均有统计学意义。
3、正常人外周血IFN-γ浓度(9.18±2.31)要高于大肠癌患者(6.26±1.43)(P<0.05),大肠癌患者外周血IL-4浓度(8.88±1.30)要高于正常人(5.20±1.71)(P<0.01),大肠癌患者外周血IFN-γ/IL-4(0.70±0.10)低于正常人(1.82±0.35)(P<0.01),大肠癌患者免疫平衡向Th2型偏移,均有统计学意义。
4、30例大肠癌患者癌组织中DcR3基因的表达水平与外周血的CD4T/CD8T细胞比值呈负相关关系(rCD4T/CD8T=0.335,t=0.003);对于机体免疫平衡状态亦呈负相关关系(rIFN-γ/IL-4=-0.251,t=0.039),均有统计学意义。
结论:1、大肠癌患者癌组织DcR3基因的表达水平明显高于正常粘膜组织的表达水平。
2、大肠癌患者外周血CD4T和CD8T细胞的比值明显低于正常人水平,CD4T/CD8T细胞比值下降,并且机体免疫平衡向Th2方向偏移。
3、大肠癌患者癌组织DcR3基因高表达,可能是导致机体细胞免疫功能降低和免疫平衡偏移的重要因素。
4、DcR3可能成为一种新的免疫肿瘤标记物。