VP3基因联合多西紫杉醇诱导人前列腺癌细胞株凋亡的实验研究

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目的探讨鸡贫血病毒中VP3基因在人非激素依赖性前列腺癌细胞株PC-3中的表达,观察VP3基因、多西紫杉醇各浓度及VP3基因联合多西紫杉醇各浓度对PC-3细胞株的凋亡作用。方法构建重组真核表达载体PcDNA3-VP3,采用脂质体LipofectamineTM介导的基因转染法转染人前列腺癌细胞株PC-3。利用RT-PCR技术检测VP3基因在PC-3细胞株中的表达状况。将多西紫杉醇浓度分为三组,分别为10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L。应用光镜、HE染色、透射电镜形态学、MTT法、流式细胞仪TUNEL法观察单独转染重组质粒PcDNA3-VP3、多西紫杉醇各浓度及重组质粒PcDNA3-VP3联合多西紫杉醇各浓度对前列腺癌细胞株PC-3的影响。结果成功酶切鉴定及测序分析表明VP3基因与预期相符。RT-PCR结果表明,转染PC-3细胞后VP3基因在细胞中得到了表达。光镜、HE染色和透射电镜下观察到PC-3细胞的典型凋亡形态学特征。MTT法检测结果显示转染质粒PcDNA3-VP3,单独应用10-7mol/L以上浓度的多西紫杉醇及转染质粒PcDNA3-VP3联合应用10-8mol/L以上浓度的多西紫杉醇均可使PC-3细胞株的增殖活性明显下降(P<0.01)。流式细胞仪TUNAL法检测单独转染质粒PcDNA3-VP3、质粒PcDNA3-VP3联合10-8mol/L浓度组及质粒PcDNA3-VP3联合10-7mol/L浓度组后24h、48h、72h各个时间点上的PC-3细胞株凋亡率分别为(20.31±1.96)%、(41.50±1.03)%、(50.03±3.00)%,(P<0.01);(31.10±0.59)%、(53.10±0.77)%、(68.90±2.66)%(P<0.01);(40.01±0.53)%、(62.23±0.74)%、(75.20±0.53)%(P<0.01)。转染PcDNA3-VP3组高于转染PcDNA3及细胞对照组、脂质体对照组(P<0.01),联合用药组高于单独转染PcDNA3-VP3组(P<0.01)。结论鸡贫血病毒VP3基因的表达能够早期、高效地诱导人前列腺癌PC-3细胞株凋亡。联合10-8mol/L以上浓度的多西紫杉醇能明显增加VP3基因诱导人前列腺癌PC-3细胞株凋亡。预计联合用药可能会减少临床应用时多西紫杉醇的浓度,减少并发症。并为激素非依赖性前列腺癌的基因治疗联合化疗提供了新的思路。
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