紫斑牡丹花粉质量标准的建立及其抗氧化活性研究

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紫斑牡丹(Paeonia rockii)为毛茛科(Ranunculaceae)芍药属(Paeonia)多年生木本植物,是我国中西部地区的特有中药材和花中珍品,其根皮作为药用丹皮被甘肃省中药材标准收载,具有清热凉血,活血化瘀的功效。为了开发和利用紫斑牡丹,本文在查阅大量文献的基础上,对牡丹的花、籽、根、花粉、叶各部位在食用和药用方面的研究进展进行了综述,并围绕紫斑牡丹花粉开展了有关质量标准及其抗氧化活性的研究,主要研究内容和结果如下:1.紫斑牡丹花粉质量标准的初步研究:按照2015版药典通则的相关方法,对紫斑牡丹花粉的性状、显微特征的进行了研究和描述;测定了总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的含量;采用TLC法,对紫斑牡丹花粉中的黄酮类成分槲皮素、木犀草素、山奈酚、异鼠李素进行了定性鉴别;采用紫外-可见分分光光度法,对紫斑牡丹花粉中总黄酮的含量进行了测定。结果表明,紫斑牡丹花粉为黄色粉末,体轻,易飞扬,气微,味微苦;显微镜下可见花粉粒类圆形或椭圆形,表面有网状雕纹,具三拟孔沟,直径32-38μm;其总灰分、酸不溶性灰分、浸出物的平均含量依次为7.45%、1.55%、28.99%;所建立的薄层鉴别方法斑点清晰、专属性好,可用于紫斑牡丹花粉的定性分析;测得紫斑牡丹花粉中总黄酮的平均含量为15.80mg·g-1。2.响应面法优化紫斑牡丹花粉中总黄酮的提取工艺:采用Agilent Eclipse plus C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-乙腈-0.1%磷酸(25:13:62)为流动相等度洗脱,流速:1.0mL·min-1,检测波长:360nm,柱温35℃,建立了RP-HPLC法同时测定紫斑牡丹花粉中槲皮素、木犀草素、异鼠李素含量的方法;继而通过单因素实验遴选影响紫斑牡丹花粉总黄酮提取工艺的因素和水平,并采用Box-Behnken试验设计法,以总黄酮的含量及其3种黄酮类化合物(槲皮素、木犀草素、异鼠李素)的总含量的综合评分为评价指标,以乙醇浓度、料液比、提取时间为考察因素,利用响应面法对紫斑牡丹花粉总黄酮提取工艺进行优化。结果表明:优选得到的最佳提取工艺为乙醇浓度为73%,料液比1:22g/mL,回流提取2次,每次100min;在此条件下,理论值与实际值接近,偏差为1.60%。优选的紫斑牡丹花粉总黄酮的提取工艺合理可行。3.紫斑牡丹花粉不同浓度乙醇提取物的抗氧化能力研究:通过测定紫斑牡丹花粉不同浓度乙醇提取物的3种抗氧化能力(铜离子还原能力,DPPH自由基和ABTS自由基的清除能力),对紫斑牡丹花粉不同浓度乙醇提取物的抗氧化活性进行评价。结果表明:铜离子还原能力(CUPRAC)法测得紫斑牡丹花粉无水乙醇提取物、75%乙醇提取物、50%乙醇提取物、25%乙醇提取物、水提取物的抗氧化活性没食子酸量依次为26.00、28.33、28.90、14.98、9.24 mg/g;紫斑牡丹花粉不同浓度乙醇提取物清除DPPH自由基和ABTS自由基能力均均低于Vc,其顺序依次为:50%乙醇提取物>75%乙醇提取物>无水乙醇提物>25%乙醇提取物>水提取物。紫斑牡丹花粉不同浓度乙醇提取物均具有较强的抗氧化能力,以50%、75%乙醇提物的抗氧化能力最强。
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